收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

厚朴细胞培养与超低温保存的研究

陈慧丽  
【摘要】:厚朴(Magnolia officinalis Rehd. et Wils)是木兰科(Magnoliaceae)木兰属(Magnolia)木本植物。厚朴全身都是宝,是我国多种用途的经济树种,集饮料、食品、药材、木材和美化环境于一体。厚朴树体高大、树形优美、叶大宽阔、花大洁白、抗病虫、抗污染、生命力极强,是当今街道、公园、住宅小区、花坛、庭院绿化和城市环境美化的理想树种。它与麝香、甘草、杜仲被列为国家指令性管理的4种重要中药材,远销东南亚和日本。厚朴提取物中含有丰富的化学物质,据我国最早的药学专著《神农本草经》记载,厚朴系芳香化湿中药。厚朴药用历史悠久,是木兰属分布较广,而且是较原始的种类,对研究东亚和北美的植物区系及木兰科分类有科学意义。 然而,长期以来受自然灾害和人类对野生药用植物资源的掠夺性开发利用,使得许多药用植物的野生资源濒临枯竭,随着人口的增长和对药用植物资源需求的急剧增加,造成了厚朴野生资源不断减少,现已被列为国家Ⅱ级重点保护野生植物。对濒临枯竭的厚朴种质资源的保存已成为至关重要的问题。 本研究运用植物细胞培养技术,对厚朴愈伤组织培养和细胞悬浮培养技术体系进行了探索,本文通过研究不同因子对厚朴悬浮细胞生长的影响,建立一个快速生长的细胞悬浮培养体系,为用细胞培养技术生产厚朴中有效化学成分提供一些参考。近年来,关于厚朴种质资源保存的研究也不少,为凹叶厚朴的资源再生和种质保存提供了宝贵的技术资料和重要的理论依据,但关于厚朴的悬浮细胞培养超低温保存的研究并不多见。因此,本试验是在前人研究工作的基础上,加以改进和完善,做了厚朴的悬浮培养细胞超低温保存的初步研究,为厚朴种质资源保存措施提供实验基础。主要研究结果如下: 1.愈伤组织诱导和继代培养:在厚朴愈伤组织的诱导试验中,各种培养基很大范围内都可以产生愈伤组织,但试验结果表明,以B_5+NAA1.0mg·L~(-1)+6-BA1.0mg·L~(-1)为最适培养基;以B_5+2,4-D2.0mg·L~(-1)+6-BA1.0mg·L~(-1)为培养基最有利于愈伤组织分化。最佳外植体是顶芽和茎段;附加浓度为3.00mg·L~(-1)抗坏血酸最有利于防止愈伤组织褐变;不同激素对厚朴愈伤组织的诱导效果依次是:2,4-D6-BA NAA;愈伤组织培养35d为最佳收获时间。 2.悬浮细胞培养体系的建立:在厚朴细胞悬浮培养中,研究了基本培养基、接种量、激素组合、蔗糖浓度、摇床转速、pH值、通气状况对悬浮培养细胞生长的影响。厚朴悬浮细胞培养体系经过优化,试验结果表明,最适厚朴细胞生长的培养基是B_5+NAA1.0mg·L~(-1)+6-BA1.0mg·L~(-1)和B_5+2,4-D2.0mg·L~(-1)+6-BA1.0mg·L~(-1);最佳接种量为0.1g/mL;蔗糖浓度为30g·L~(-1)时最有利于细胞生长;最佳摇床转速为110rpm;厚朴悬浮培养细胞的液体培养基的pH值在5.6~5.8之间最适合细胞生长;厚朴细胞悬浮培养过程中用棉塞封口效果最好;细胞培养的周期为24d比较好。 3.厚朴悬浮细胞超低温保存的研究:对厚朴悬浮细胞超低温保存中的几个主要因素进行单因子比较试验,研究分析了厚朴悬浮细胞的生理状态以及各种冷冻前处理等因素对超低温保存后细胞生活力的影响。试验结果表明,继代多次后预培养6d、处于旺盛生长期的细胞、采用分步冷冻法,超低温保存后生活力最高;“10%DMSO+5%Suc”作为冰冻保护剂对超低温保存厚朴悬浮细胞起到最佳保护效果,是首选的理想冷冻保护剂;较好的降温程序是将厚朴悬浮细胞装入冷冻管,在0℃冰水中预处理30min,然后放进低温冰箱(一80℃),以0.5℃/rain的降温速度从0℃降至一30℃,在此温度下停留lh,最后投入液氮(一196℃)中保存。悬浮细胞在液氮中保存10d后,取出用30℃温水解冻效果较好;对超低温保存后细胞的恢复性生长进行验证,发现黑暗环境有利于细胞恢复生长。 综上所述,研究厚朴细胞培养与超低温保存,对推动其药用活性成分和种质资源保存的应用技术研究具有积极意义。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 斯金平,张志松,潘心平;厚朴研究综述[J];浙江林业科技;1994年01期
2 张国营;;黄母牛乳腺增生治验[J];甘肃畜牧兽医;1987年03期
3 杨华;;清新益气话“花饮”[J];中国花卉盆景;2000年09期
4 常东科;口腔异味主何疾[J];农家顾问;2001年11期
5 ;国家中医局推出重点推荐中药材发展菜单[J];中国农业信息快讯;2002年02期
6 皮运楚 ,李兴国 ,李迪友 ,朱德明;绿色的宝库[J];国土绿化;2002年12期
7 王柏成;一批中药材列入重点推荐发展“菜单”[J];农村百事通;2002年08期
8 ;重点发展的中药材品种[J];农家顾问;2004年05期
9 林乾良,何立峰;茶疗专题讲座 第十三讲 有关镇静安神的茶疗[J];茶叶;1998年01期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄恒青;骆云丰;;杨春波运用清化饮经验举隅[A];中华中医药学会脾胃病分会第二十次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2008年
2 马桂英;郑金海;;从肝论治失眠二则[A];2009年全国基层优秀中医表彰大会暨全国第二次民间验方、诊疗技术学术研讨会会议论文集[C];2009年
3 胡忠平;李云文;;蒿芩清胆汤临床新用[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年
4 王维武;唐旭东;;养阴行气案二则[A];中华中医药学会脾胃病分会第十八次学术交流会论文汇编[C];2006年
5 苗苗;荣莹;左平国;吕慧;贾根梅;李莉华;孙桂菊;;12种市售食用花卉总黄酮含量及抗氧化活性的研究[A];妇幼与青少年营养进展学术研讨会及《中国孕妇、乳母和0-6岁儿童膳食指南》宣传推广会论文汇编[C];2009年
6 毛水泉;丁泳;;清解抗萎汤治疗萎缩性胃炎癌前病变50例临床观察[A];第二十一届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨国家级中西医结合消化系统疾病新进展学习班论文汇编[C];2009年
7 胡忠平;郭辉雄;李云文;;溃疡性结肠炎的证治心悟[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年
8 宋立英;陈大权;;胃痛同病异治[A];中华中医药学会第二十一届全国脾胃病学术交流会暨2009年脾胃病诊疗新进展学习班论文汇编[C];2009年
9 孙桂菊;;食用花卉的功效成分及作用[A];《植物化学物及膳食补充剂的研究进展》专家高层论坛会议资料[C];2011年
10 原丹;施志强;马榕花;;肖诏玮老中医诊治小儿感冒临证经验初探[A];第24届全国中医儿科学术研讨会、中医药高等教育儿科教学研讨会、儿科名中医讲习班论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 徐小娜;中药色谱指纹图谱研究及化学计量学方法的应用[D];中南大学;2010年
2 杨竹雅;厚朴叶药用价值研究[D];成都中医药大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 董昌平;福建厚朴资源及闽北厚朴规范化栽培研究[D];福建农林大学;2013年
2 高德强;厚朴有效成分含量分析及优树选择初步研究[D];西北农林科技大学;2013年
3 乔青青;厚朴抑菌成分的高效提取及应用研究[D];河南工业大学;2012年
4 惠恩健;佛手片、砂仁等中医理气药的有效成分溶出规律研究[D];浙江中医药大学;2013年
5 孔玲;厚朴良种选择及其RAPD种源鉴别研究[D];福建农林大学;2010年
6 岳欣;厚朴与远志配伍对胃—肠—血浆中的远志酸及血浆化学指纹图谱的影响[D];成都中医药大学;2011年
7 陈慧丽;厚朴细胞培养与超低温保存的研究[D];福建农林大学;2012年
8 房志科;何炎燊名中医脾胃病诊疗经验的信息化研究[D];广州中医药大学;2010年
9 高烁烁;运脾利胆方治疗脾胃不和型小儿厌食的临床研究[D];广州中医药大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 毛德西;六和汤临证治验心得[N];中国中医药报;2006年
2 毛德西;感冒余证的中医调治[N];家庭医生报;2005年
3 毛德西;疑难病证治验三则[N];中国中医药报;2006年
4 李波洋;治顽固性呃逆方[N];民族医药报;2005年
5 刘建设 河北省魏县中医院 高社光 河北省鸡泽县中西医结合医院;路志正教师治病擅用茶饮方[N];中国中医药报;2006年
6 毛德西;感冒余证精心调治[N];大众卫生报;2005年
7 马荫笃 马 丹;肥胖症的辨证治疗[N];中国中医药报;2006年
8 李军祥;慢性萎缩性胃炎的辨证用药体会[N];中国医药报;2007年
9 ;中医治疗中暑高热[N];农村医药报(汉);2008年
10 张城;中医治疗耳蒙验案[N];农村医药报(汉);2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978