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北冬虫夏草多糖对CCl_4致小鼠急性肝损伤的影响

呼晨  
【摘要】:通过北冬虫夏草多糖对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的肝脏结构和功能影响的研究,探讨北冬虫夏草多糖的作用机理,为进一步研究北冬虫夏草多糖对动物的保健,尤其在保肝方面的应用与推广提供科学资料和理论依据。本试验采用水提醇沉法的工艺改良提取北冬虫夏草多糖。通过设计正交试验L9(34)优化北冬虫夏草多糖提取条件,以苯酚-硫酸法测定多糖含量,得出最佳提取工艺的条件及提取率为:提取时间3h,料液温度80℃,料液比1:30,提取率为17.14%。试验的设计与实施。将120只雄性昆明种小鼠实验室适应性喂养1W后,随机分为试验A组、试验B组。A组、B组均设空白对照组,CCl4模型组,北冬虫夏草多糖低剂量组70mg-(kg.d)-1、中剂量组140 mg·(kg.d)-1、高剂量组280 mg·(kg.d)-1,联苯双酯阳性对照组140mg·(kg.d)-1,每组小鼠10只。除空白组、模型组以外,其它各组都以相应药物(按0.2mL·20g-1)灌胃。在喂药的第8 d、第11 d和第14 d,除空白对照外,各试验小鼠均以(0.2mL·20g-1)的0.2%CCl4花生油灌胃。A组在第14d CCl4花生油灌胃16h后,所有参试小鼠眼球放血并脱颈致死,分别剖检与取材。B组继续灌药2W后眼球放血和脱颈致死,分别剖检与取材。参试小鼠的血清检测指标有:AST、ALT、ALP、总胆红素以及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase);肝均浆测定的有:SOD、GSH、MDA;肝脏组织显微结构的观察和肝组织细胞凋亡的检测,较为系统研究了北冬虫夏草多糖对CCl4所致小鼠急性肝损伤在结构和功能的影响,为北冬虫夏草多糖的保肝、保健以及在兽医临床与动物养殖上的应用提供科学依据。研究的结果如下:(1)北冬虫夏草多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤的血清ALT、AST、ALP和血清总胆红素及NAGase的影响。灌服北冬虫夏草多糖2W后,与模型组比较,北冬虫夏草多糖剂量组能使各试验组小鼠的血清ALT、AST、ALP活性和血清总胆红素含量降低,NAGase舌性下降,高剂量组与联苯双酯组差异极显著(P0.01)。灌服北冬虫夏草多糖4W后,北冬虫夏草多糖高剂量组小鼠的血清ALT、AST、ALP、NAGase活性与空白对照组比较差异不显著(P0.05),血清总胆红素含量差异显著(P0.05)。(2)北冬虫夏草多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤的肝均浆SOD、GSH、MDA的影响。灌服北冬虫夏草多糖多糖2 W后,与模型组比较,北冬虫夏草多糖各试验组小鼠的肝均浆中SOD活性升高、GSH的含量增加,肝脏组织MDA的含量降低,北冬虫夏草多糖低剂量组效果差异显著(P0.05),高剂量组差异极显著(P0.01)。灌服北冬虫夏草多糖4 W,与空白对照组相比,北冬虫夏草多糖各剂量组效果明显,其中高剂量组效果最佳,SOD活性明显升高,GSH、MDA含量与空白组比较差异不显著(P0.05)。(3)光学显微镜观察(HE染色)。模型组肝脏结构严重破坏,中央静脉周围的肝细胞凝固性坏死,肝脏细胞呈现广泛的中、重度水泡变性或空泡变性和脂肪变性,大片肝细胞成无结构的红染和细胞碎片,少量残存的肝细胞不同程度细胞变性。灌服北冬虫夏草多糖2W后,北冬虫夏草多糖各试验组均表现出一定的抗损伤和修复作用。高剂量组肝细胞排列比较整齐,部分肝细胞轻度肿胀,细胞坏死明显减少,双核细胞增多,呈现较为明显的肝脏损伤后的修复过程。灌服北冬虫夏草多糖4W后,可见各试验组小鼠肝组织空泡变性和脂肪变性明显减少甚至消失,仅有少量的坏死,且北冬虫夏草多糖高剂量组与联苯双酯组肝细胞双核细胞增多。(4)北冬虫夏草多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤细胞凋亡的影响。灌服北冬虫夏草多糖2W,光镜观察,模型组可见肝细胞凋亡数量较多,单个或成群分布;北冬虫夏草多糖组凋亡细胞数量较少,散在分布。灌服北冬虫夏草多糖4 W,模型组凋亡细胞数目明显减少,北冬虫夏草多糖组肝细胞凋亡数目明显减少,其中高剂量组效果最明显,表明北冬虫夏草多糖对急性肝损伤小鼠的肝脏的修复作用。研究的创新点如下:(1)对北冬虫夏草多糖对小鼠急性化学性肝损伤的结构和功能影响作了较为系统的研究。(2)对北冬虫夏草多糖对小鼠急性化学性肝损伤的肝细胞凋亡情况作了较为详细的研究。(3)探讨了北冬虫夏草多糖与CCl4致小鼠急性肝损伤血清NAGase之间的相关性,为NAGase在兽医临床应用提供了参考依据。


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