鲍鱼内脏酶解蛋白质制备抗氧化肽的研究

【摘要】：鲍鱼是中国传统的名贵食材,含有丰富的蛋白质、钙、铁、碘和维生素A等营养物质,其营养价值是澳大利亚核桃的7倍。鲍鱼内脏占鲍鱼体重的20-30%,同样含有丰富的蛋白质等营养物质。由于鲍鱼有很高的食用与药用价值,可以带来很高的经济效益,对其加工的研究也越来越多。而在加工中同样具有药用价值的鲍鱼内脏则成为下脚料被废弃。从鲍鱼内脏中提取抗氧化肽很好地解决了鲍鱼内脏下脚料利用的问题。提取的抗氧化肽,不但可以作为功能性营养物质,还能有效清除体内过剩的活性氧自由基,保护细胞和线粒体的正常结构和功能,在预防和治疗自由基诱发的疾病和抗衰老方面有广泛的应用前景,同时也可作为抗氧化剂应用到食品加工行业中。本研究以鲍鱼内脏粗蛋白为实验材料,运用酶解法和超滤透析去盐法提取鲍鱼内脏中具有抗氧化活性的多肽,并通过体外和体内抗氧化活性测定实验综合评价其抗氧化活性,为促进鲍鱼内脏的综合开发和利用提供理论基础和技术支持。本研究的结果如下：1.以水解度和酶解物的还原性为指标,从中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶与碱性蛋白酶中确定了碱性蛋白酶为最佳的水解酶,其优化的酶解工艺条件为：pH值10,酶解时间5h,酶解温度45℃,酶用量为4500 μ/g,底物浓度为13%。2.确定了酶解产物纯化的工艺：在上述条件下获得的鲍鱼内脏蛋白质酶解液→超滤分离→加酸中和→去盐→冷冻干燥→抗氧化肽成品,确定了多肽的得率为69.40%。3.从多肽的总抗氧化活性、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力三个方面评价两种不同分子量的抗氧化肽的抗氧化活性。测定结果表明分子量为0-3K的抗氧化肽的抗氧化活性大于3K-10K的抗氧化肽；当多肽浓度为1.94mg/ml时,其抗氧化活性与40ug/ml Vc的总抗氧化能力相当；其羟自由基平均抑制能力略高于40ug/ml的Vc；其清除超氧阴离子的平均活力单位为186.18 μ/g。鲍鱼内脏蛋白质抗氧化肽提取物具有较好的体外抗氧化活性,这是由于小分子量的多肽暴露出更多的活性基团,增加了其抗氧化活性。4.采用D-半乳糖衰老模型小白鼠进行动物实验,以小鼠中肝脏和血清中的谷胱甘肽、丙二醛以及超氧化物歧化酶的含量为指标,探索抗氧化肽的体内抗氧化活性。其结果为：阳性对照组和高剂量组的血清和肝脏中SOD和GSH的含量显著高于衰老组(p0.05),并且血清和肝脏中MDA的含量显著低于衰老组,中剂量组血清中SOD的含量显著高于衰老组,中剂量组和低剂量组的肝脏和血清GSH和MDA的含量与衰老组没有显著差异(p0.05),中剂量组肝脏中SOD的含量与衰老组没有显著差异,表明维生素C和鲍鱼内脏蛋白质中抗氧化肽提取物能够提高由D-半乳糖诱导的衰老小白鼠的抗氧化活力,抗氧化肽提取物能够有效防止机体受到氧化性物质的侵害,提高机体的抗氧化活力,具有体内抗氧化性并且具有剂量依赖关系。