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番鸭呼肠孤病毒受体的研究

孙军杰  
【摘要】:目的:近年雏番鸭感染呼肠孤病毒后出现高死亡率,结合临床症状及相关资料推断番鸭呼肠孤病毒受体很可能为β2-肾上腺素受体,本文拟通过确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)受体分子量并与哺乳动物呼肠孤病毒3型受体即β-肾上腺素受体分子量相比较看二者有无相关性,并从动态方面检测该病毒感染对番鸭肾上腺素释放水平的影响,看该病毒受体与β-肾上腺素受体的关系,从而对番鸭呼肠孤病毒受体的定性提供进一步的证据,为研制相关抗病毒药物提供理论依据。 方法与结果:通过将培养的生长旺盛的番鸭成纤维细胞接种DRV B3病毒株增殖病毒,待细胞病变达50%~80%时收毒,冻融三次后离心浓缩病毒液,并通过盐析和透析提纯病毒液,紫外分光法测病毒蛋白浓度为5mg/mL。攻毒大番鸭采血制各血清测琼扩效价达1:32。提纯番鸭红细胞膜蛋白测浓度为29mg/mL。在膜蛋白上样浓度7.5ug/uL、标准蛋白上样浓度0.4ug/uL、上样体积50uL、恒流30mA条件下SDS-PAGE电泳后所得蛋白条带最清晰。采用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)即膜蛋白电泳完毕并转移到PVDF膜上之后依次与病毒、血清和酶标二抗作用显出病毒受体条带的方法结合由标准蛋白建立的标准曲线测定病毒受体分子量约为72kDa。攻毒后雏番鸭的肾上腺素水平前三天达到最高峰,而后随时间延长渐渐下降。 结论:番鸭呼肠孤病毒受体与β-肾上腺素受体关系密切,而且有可能同属一种膜蛋白。


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