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锥栗组织培养及其再生体系建立的研究

冯金玲  
【摘要】:锥栗的经济价值很高,是一种粮材两用的树种,树体各个部位都具经济价值,如木材可以做家具,花是蜜源,叶子是蚕食等,特别果实是一种不可多得的木本粮食,果肉中含有大量的淀粉、蛋白质和各种维生素。但锥栗是扦插不易生根的植物。目前,锥栗的品种混乱,病害严重,且对锥栗的研究大部分是宏观的,微观上的研究相对少。 本研究通过组织培养的手段,建立锥栗的再生体系,为锥栗良种选育,定向培育及遗传转化和基因克隆等方面的研究,提供基础手段和理论依据。 本研究采用的材料来自于福建省建瓯市水源乡桃源村,分别把油筒子、油榛、黄榛、大尖嘴、油栗子、白露子、中尖嘴、乌榛、乌壳长芒、欧宁子、坝头子、处署红、穗榛这13个品种的不同部位作为外植体,如胚、腋芽、韧皮部等,进行愈伤组织培养、增植愈伤组织培养、分化愈伤组织培养、诱发不定芽培养、增植不定芽培养及生根培养,形成再生植株,移栽成苗。研究了基本培养基,激素种类和浓度,品种,外植体类型,接种方式,褐化,糖的种类和浓度,维生素B_1,赤霉素,培养基的其它有机添加物,琼脂,pH和外界环境条件等因素对锥栗组织培养的影响。得到了如下结果: 1.升汞和次氯酸钠不同浓度在不同时间下对锥栗胚、腋芽、韧皮部等外植体进行消毒,其效果差。但在75%酒精消毒果仁的情况下,直接取的胚可以很好的控制污染率。 2.13个品种的锥栗作为材料,得出最佳品种是油榛,其次黄榛、大尖嘴等,接着是处署红等,而最差等级是油筒子、穗榛、白露子等。锥栗的不同器官作外植体时是以胚为最好。并且以胚根插入培养基为最好的接种方式 3.锥栗愈伤组织培养途径的基本培养基是MS,在诱导愈伤组织时生长素2,4-D优于NAA和IBA。愈伤组织增植时生长素优于分裂素,而且在生长素中以2,4-D最好。对于愈伤组织的分化,虽然整体上分化不理想,但实验也得到一些结果:分裂素BA对锥栗分化的效果优于KT,生长素IBA优于IAA,对于分裂素BA,随着浓度从低到高,其分化效果从好到差;当分裂素BA为5mg/l时,愈伤组织的生长受到威胁,甚至褐死;在分裂素与生长素的作用效果上看,当BA为3mg/l时NAA为0.5mg/l时分化效果好。当BA为1.5mg/L时,NAA0.2mg/l和NAA0.5mg/L为佳,可见不同种类浓度的分裂素与之搭配的生长素的浓度和种类也不同;在AgNO_3对愈伤组织的作用中,AgNO_3 1mg/l对锥栗愈伤组织的分化没有起到作用。 4.锥栗不定芽生长的基本培养基是M基本培养基。在锥栗不定芽的预实验中得到了锥栗不定芽诱发的BA以低浓度1mg/L好于其它的高浓度的 锥栗组织培养及其再生体系建立的研究 处理,在生长素对锥栗不定芽诱发的实验中得到份A对于锥栗的芽生长 是最适合的,其次是NAA,最后是IAA。激素配比的实验中,锥栗的 胚在分裂素与生长素的比例为8:l时,锥栗能诱发出正常的不定芽。 但并不是相对含量越高或者越低越好,而是有一定的适应范围,得出三 种好的处理,分别为BA十NAA二Zm幼十0.2一0.4m酬, BA+IBA=2m幼+0,4nlg/1,BA+IBA“1 .sm幼+0.2mg/l。且以 BA+I BA司.sm酬+0 .2m酬处理的激素配比为最佳。锥栗不定芽增植的最 佳激素配比是BA+认A=o.75mg/l+o.4m酬。 5.锥栗不定芽促根的基本培养基是M基本培养基。在激素的含量与种类 对锥栗不定芽生根的影响实验中生长素IBAlm留1对锥栗的不定芽促根 起到极显著作用。 6在锥栗抗褐变的实验中,添加不同的抗褐变的物质,其结果只有AC起 到比较明显的作用,而PVP和N匆503只发挥较小作用,但抗坏血酸却 起反作用。在锥栗碳源的种类和浓度实验中,得到蔗糖是最佳的碳源, 且最佳的蔗糖浓度为40%。在维生素B,的实验中得到维生素Bllm留l 对锥栗的不定芽生长有促进作用。在组织培养中加入一些有机营养成 分,如水解酪蛋白(HC),谷氨酞氨,叶酸(维生素BC)和D一泛酸钙, 对锥栗的不定芽生长起到了抑制作用。GA对锥栗的不定芽有促进作用。 在琼脂浓度对比实验中,锥栗外植体生长最适合的浓度是7%。锥栗培 养物生长的最佳pH值是5.5。在N氮素对比实验中,NH3No;和KNO3 的最佳含量分别为825m酬和950m幼。Fe因子对比实验得到最好的Fe 含量是27.smg/l。 7.本实验对光照的强度和温度分别作研究,并得出锥栗最适合光照是 20001ux光强和最适合温度是28oC。 8.锥栗的植株生出了完整的根系后,可进行移栽。进行炼苗,先在光照培 养室中旋开瓶盖,静放2一3天,然后再把带苗的瓶子拿到自然光的房间 中放4天左右,最后把带苗的瓶子拿到强自然光的外界环境中放2天左 右。然后把苗移栽到沙基质中。


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