番茄防病内生细菌ZB-6的初步研究

【摘要】：2002-2004年，对番茄根、茎、叶等组织可培养内生细菌进行分离培养，获得了大量的内生细菌菌株。通过拮抗作用测定，从分离自番茄叶片的菌株中，筛选出对主要作物病原微生物具有较强拮抗作用的番茄内生细菌菌株ZB-6。在种类鉴定的基础上，对ZB-6在番茄体内的内生定殖能力、培养过滤液的抑菌活性与机制，进行了较为系统地研究，同时，评估了该菌株对番茄青枯病的生防作用。通过三年的实验，取得以下实验结果： 1、番茄组织中存在大量的内生细菌。采用平板分离法，对番茄植株内生细菌进行分离培养，结果表明，番茄根、茎、叶等组织中存在大量的可培养内生细菌，各组织内生细菌数量约为：1.78×10~3～2.75×10~4CFU／克(FW)，根中内生细菌含量最多，叶中次之，茎中最少。 2、部分番茄内生细菌对病原菌具较为明显的拮抗活性。对分离所得的93个可培养内生细菌株进行拮抗作用测定，38个菌株对待测病原真菌表现出拮抗活性，12个菌株对番茄青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)具有拮抗作用，拮抗菌频率为40.86％，其中从番茄叶片中分离获得的菌株ZB-6，对待测病原真菌与细菌的拮抗作用最强。 3、经形态学和生理生化特征测定，确定菌株ZB-6为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 4、菌株ZB-6可在番茄体内成功定殖并迅速传导。对ZB-6进行利福平(500μg／ml)抗性标记，采用灌根和叶片喷雾接种，测定ZB-6在番茄体内的定殖与传导，结果表明，标记菌株可进入番茄体内并成功增殖，35d后在番茄植株内各器官均可分离到大量的标记菌株；标记菌株能在番 茄植株内自由转移，其转移速率因接种部位不同而略有差异。 5、菌株ZB一6培养滤液具有较强的抑菌活性，可引起病原物发育异 常，甚至死亡。对菌株zB一6培养滤液的抑菌活性进行测定，结果表明， 培养滤液对多种病原菌有较强的抑制作用，根据测试病原菌的不同，培 养滤液的拮抗能力呈现较大差别。该培养滤液可使番茄早疫病菌(茄链 格抱，Alternarl’asoZanl’)分生抱子萌发异常，芽管畸形膨大，呈泡囊状， 24h后，泡囊消融、破裂，分生抱子萌发受到完全抑制。 6、菌株ZB一6对番茄青枯病具有良好的控制效果。盆栽试验表明， 菌株ZB一6对番茄青枯病具有良好的防效，7d时防效达63.7%，27d时平 均防效仍高达58.0%。田间防效略低。据认为，菌株ZB一6以拮抗和竞争 二种方式协同作用，来控制番茄青枯病的危害，其接种时间对病害防治 效果影响显著。