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鹌鹑体外受精和胚胎移植的研究

李玉芳  
【摘要】:为在鹌鹑乃至禽类直接有效的实施配子和胚胎工程扫清禽蛋结构复杂,胚胎发育过程特殊带来的障碍,为加速转基因改良禽类品种以及胚胎冷冻、核移植和性别控制等的进程,发挥禽类作为生物反应器的优势,获得特定生物制品铺平道路,促进禽类生物技术的快速发展。本实验从以下几个方面进行研究: 1 鹌鹑胚胎的体外培养 利用4种不同的方法对鹌鹑胚胎进行体外培养,每种方法均采用100个样本,方法Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的出雏情况为0,30%,10%,20%。4种方法出雏率与对照组相比差异显著(p<0.05),其中方法Ⅱ和方法Ⅳ的效果最佳。通过对各阶段胚胎存活情况的记录以及出雏率的比较,用方法Ⅰ和方法Ⅲ进行培养的鹌鹑的存活率情况接近,用方法Ⅱ和方法Ⅳ进行培养的鹌鹑的存活率相似。 2 鹌鹑体外受精和培养 选择6月龄左右、公母分群饲养的母鹌鹑100头,经过长期产蛋规律观察后,在下午16:30min左右处死鹌鹑,通过腹腔或生殖道收集卵母细胞,体外受精后进行完全体外培养。按不同的采集部位分类观察受精后的培养情况,试验结果表明:只有在漏斗部收集的卵子与精子结合,受精率达到32%,24h后胚胎发育率为20%。 由母鹌鹑所产的带壳无精蛋,用微量注射器直接注射精子后培养24h有30%的受精率,48h后20%的发育率,72h后全部死亡。 3 鹌鹑胚胎移植与培养 将受精蛋的胚盘移植到受体蛋上,转入代用蛋壳后进行培养。共进行了100个处理,有1%的鹌鹑出孵,说明了异体胚盘移植的可行性。异体胚盘移植的成功表明,同属动物间的同功物质(卵黄和稀蛋白)具有通用性,这为嵌合体和转基因鸡的生产奠定了基础。 将从鹌鹑体内收集的单细胞受精卵转入受体鹌鹑体内发育,共做了10例,其中3例产蛋,1例为软壳蛋,2例为正常蛋。软壳蛋进行换蛋壳培养后没有出雏,硬壳蛋直接孵化有1只出雏。


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