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放射性受体分析法快速筛检动物组织中β-内酰胺类兽药残留

张佳  
【摘要】: 目前β-内酰胺类抗生素是最为广泛使用的一类抗生素,同时β-内酰胺类是牛奶和组织中检出残留报道最多的药物。长期以来,传统的β-内酰胺类兽药残留的初筛检测多以杯碟法为主。但由于具备抑菌作用的抗生素种类繁多,且干扰因素较多。杯碟法检测阳性后难以确定抗生素具体种类,容易出现误判,假阳性率较高。而放射性受体分析法是一种对微生物受体进行标记,其原理是将放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、生物发光技术和化学发光技术相结合进行检测的新型检测技术。本文就放射性受体分析法检测β-内酰胺类兽药残留的实验方案进行了设计,并对各类参数进行了验证。主要做了以下工作: 1.制定了完整、成熟、有效的放射性受体分析法快速筛检动物组织中β-内酰胺类兽药残留检测方案,并对实验过程可能出现的影响因素进行了讨论。 2.对包括提取液的选择、pH的影响、孵育时间在内等影响检测的实验条件进行选择与确定,最终选择pH 7.0的MSU萃取缓冲溶液作为提取液,并将温浴时间确定为2min。 3.对检测的选择性和特异性进行验证。分别选择了青霉素G钾、阿莫西林、氨苄西林、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢噻呋进行交叉反应试验,实验结果表明该测定方法对各β-内酰胺类药物具有良好的选择性;用MSU缓冲溶液配制1000μg/kg的恩诺沙星、新霉素、庆大霉素、链霉素、螺旋霉素、林可霉素、四环霉素、氯霉素、磺胺二甲基嘧啶、红霉素的混合标准溶液对检测方案的特异性进行验证,6次检验结果cpm均明显高于表3中β-内酰胺类药物的cpm值,结果确定为阴性,实验结果表明该方法对β-内酰胺类药物有良好的特异性。 4.对检测方案的检测限进行了研究。灵敏度实验结果表明,当药物浓度增加到20μg/kg后,如果将药物浓度继续增大也无法对测定的cpm值产生明显的改变;确定及验证不同基质中检测限的结果表明,各种基质中ln(ρ)均与cpm值存在着良好的线性关系,猪肉、牛肉、鸡肉、鱼肉及虾肉等基质的检测控制点分别为930、865、955、994和890。 5.对检测的影响因素进行了讨论,发现样品中的微生物及动物组织中的脂肪成分均可能影响检测的结果。 6.分别选择五家独立实验室对检测方案进行验证,结果对于检测限以上的各种添加样品均显示阳性结果。这表明建立的检测方案有着良好的重现性。


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