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沙丁胺醇时间分辨荧光免疫分析方法的研究

何明祥  
【摘要】: 沙丁胺醇(salbutamol,SAL),又名咳喘宁,是一种人工合成有选择性β_2-肾上腺素受体激动剂的一种,能选择性激动支气管平滑肌的β_2-肾上腺素受体,临床上广泛用于治疗支气管哮喘。同时沙丁胺醇等β_2-兴奋剂还可作为牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂,研究人员对其作用及效果也进行了深入广泛的研究,并一度将其广泛应用于畜禽生产。但由于β_2-兴奋剂易在动物脏器中积聚残留,并可通过食物链进入人体,严重危害人类健康。克仑特罗由于其营养重分配作用的深入研究和广泛应用而引起有关方面的重视,国内外均已研究出快速有效的检测方法对其进行监测,使得其非法使用受到了较有效的控制,而沙丁胺醇由于检测手段研究的相对滞后,而又与克仑特罗具有同样促生长效果,因而逐步取代克仑特罗,成为不法分子谋取经济利益的新手段。因此,建立快速、简单、方便、有效的检测手段是控制沙丁胺醇非法使用的迫切任务(李颖,2006)。 本研究以沙丁胺醇为研究对象,采用Minipore超滤离心管(30kDa)纯化待标记的SAL完全抗原、单克隆抗体及羊抗小鼠IgG第二抗体后,以PerkinElmer公司芳香羧酸类螯合体系铕标记试剂盒进行标记,标记产物过葡聚糖G25凝胶柱纯化。建立了TRFIA检测SAL的四种检测模式,并对各模式中反应条件进行优化,通过对已知浓度SAL标准品的测定建立标准曲线,得到了各模式优化条件下的IC_(50)。确定了TRFIA检测SAL的最佳检测条件。该方法采用包被抗原直接竞争法,以SAL-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离SAL竞争限量的以Eu~(3+)标记的抗SAL单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测SAL。该方法的灵敏度为0.03 ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.1%和8.8%,平均回收率为106.3%,与盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.95%和0.77%,结果表明,用TRFIA法检测SAL,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。并对TRFIA与ELISA优化条件下的检测模式作了比较。为将其应用于SAL检测试剂盒的实际开发奠定了一定的理论基础。


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