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动物源和水源肠球菌万古霉素耐药表型、基因型检测及同源性研究

尹兵  
【摘要】: 目的:调查动物源(宠物医院、鸡场、猪场)、水源(闽江、小区池塘、学校鱼塘、污水沟、下水道)耐万古霉素肠球菌(Vancomycin resistant enterococcus VRE)的分离率,并对分离出的耐万古霉素肠球菌进行耐药表型、基因型检测及同源性研究,为指导兽医临床合理用药及控制VRE向人类的传播提供依据。 方法:采用琼脂平板筛选法(ADSP法)分离耐万古霉素肠球菌;根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的方法,以微量肉汤稀释法对分离出的30株动物源及17株水源耐万古霉素肠球菌进行常用6种抗菌药物的敏感性检测;用多重PCR的方法同时进行耐药基因及肠球菌种水平的鉴定;用基因外重复回文序列-PCR(Repetitive extragenic palindromic elements-PCR)对筛选出的动物源、水源耐万古霉素肠球菌进行分子分型及同源性分析。 结果: (1)从2个宠物医院、3个规模化猪场及1个规模化鸡场共420个样本,筛选出30株耐万古霉素肠球菌;从闽江、生活小区池塘、学校鱼塘、污水沟、下水道共200个样本,筛选出17株耐万古霉素肠球菌;不同猪场不同猪群的分离率以哺乳小猪最高,其次为保育小猪,不同水源的分离率以下水道最高,其次为污水沟;药敏实验结果显示,动物源、水源耐万古霉素肠球菌均以土霉素的耐药率最高,分别为93.3%和90%,均以氨苄西林的敏感率最高,分别为80%和88.2%。 (2)PCR检测万古霉素耐药基因,30株动物源耐万古霉素肠球菌中2株为VanA阳性,12株VanB阳性,7株VanC1阳性,5株VanC2/3阳性,4株未扩增出Van基因;17株水源耐万古霉素肠球菌中3株VanB阳性,9株VanC1阳性,5株VanC2/3阳性,未扩增出VanA基因。 (3) REP-PCR结果显示,30株动物源耐万古霉素肠球菌共分为13个型,用A-M表示。A型分为A1-A6亚型,F型分为F1-F3亚型,J型分为J1-J3亚型,B、C、D、E、G、H、I、K、L、M没有亚型。亲缘性分析,27、28、29号菌株具有100%的同源性,21和22、1和7、4和9、17和18、11和14、6和8等菌株间各自具有100%的同源性。17株水源VIE被扩增出3-9条带,大小在200bp-2000bp之间,共分为5个型,用A-E表示。A型分为A1-A3亚型,B、C、D、E没有亚型。5种基因型以A1型为主。A1型有6株,A2型有1株,A3型有2株, B型有3株,D型3株,C、E型各一株。9、10、11、14、16与17号,5、12与13号,3、4与7号,1与15号,均各自有100%的同源性。 结论: (1)动物源、水源均能分离出耐万古霉素肠球菌,所分离的耐万古霉素肠球菌对土霉素的耐药率最高,对氨苄西林的敏感率最高,VanA基因介导高水平耐药,VanC1、VanC2/3介导低水平耐药,耐药表型与基因型一致。 (2)同源性分析显示,同一猪场分离的耐万古霉素肠球菌具有较高的同源性,污水沟、下水道分离的水源耐万古霉素肠球具有较高的同源性。在动物源内、水源内分离的耐万古霉素肠球菌均发生不同程度的克隆传播。 (3)调查动物源、水源肠球菌对万古霉素的耐药及传播,可以有效的指导兽医临床合理用药,为控制VRE向人类的传播提供依据。


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