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环孢素A对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞水肿坏死及凋亡的干预作用

许春财  
【摘要】:【目的】: 通过观察环孢素A(CsA)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后Bcl-2、Bax及AQP-4表达的影响;探讨CsA抑制ASCI后大鼠脊髓神经细胞水肿坏死及凋亡的可能机制。 【方法】: 1.SD雄性大鼠126只,体重200~250g。随机分为单纯椎板切除组42只(A组)、ASCI组42只(B组)、ASCI后CsA治疗组42只(C组)。 2.用改良Allen,s法制作急性脊髓损伤模型。C组用环孢素A2.5mg/kg剂量腹腔注射立即给药;术后每12h按同剂量追加给药3天。A、B组用等量生理盐水替代,分为术后12h、1d、3d、7d、14d、21d、28d 7个亚组。 3.BBB评分法定期观察各组大鼠后肢运动功能,HE染色组织学观察。 4.免疫组织化学方法检测脊髓Bcl-2、Bax及AQP-4表达情况。 5.RT-PCR方法检测Bcl-2、Bax基因转录变化情况。 6.Western blot法检测AQP-4的表达情况。 【结果】: 1.ASCI模型制作成功,脊髓损伤标准及动物死亡率符合实验要求。 2.造模后12h-1d,B、C两组大鼠后肢BBB评分未见明显差异;3d-28d,C组评分明显高于B组,差异有统计学意义,而B组、C组评分均明显低于A组,差异均具有统计学意义;HE染色显示早期B组组织及细胞水肿最为明显,后期疤痕最严重,C组次之,A无明显变化。 3.免疫组化法检测各实验组各时间点都有AQP-4、Bcl-2及Bax蛋白阳性表达,脊髓损伤后,损伤区域的AQP-4、Bcl-2及Bax蛋白表达更加明显。B、C组脊髓损伤后1d即可见Bcl-2及Bax表达增高,7d达到高峰,直至14d表达仍高于A组。损伤后B组、C组12h即可见AQP-4表达增高,到术后3d达到高峰,直至7d表达仍明显高于A组。而C组相应时间点Bcl-2表达水平均高于B组,B组Bax、AQP-4表达水平均高于C组。且差异均就有显著性。 4.RT-PCR法检测显示: B、C两组各时间点Bcl-2及Bax的m RNA水平在术后1d开始明显高于A组,至7d达到高峰,术后14d仍明显高于A组,差异具有显著性,而A组各时间点间无明显差异。其中B组的Bcl-2m RNA水平各时间点均低于C组,而Bax的m RNA水平各时间点均高于C组,差异具有显著性。 5.Western blot法检测AQP-4表达,B、C两组术后12h表达水平即明显升高,术后3d达到高峰,直至7d表达仍明显高于A组,差异具有显著性;相应时间点B组表达量均高于C组,差异有显著性。而A组各时间点表达均无明显改变,且均低于其余两组,差异均有统计学意义。 【结论】: 环孢素A具有抑制大鼠ASCI后AQP-4蛋白、Bax因子的表达,促进Bcl-2因子表达,提高Bcl-2/Bax比值;从而抑制神经细胞水肿坏死及凋亡的作用。


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