收藏本站
收藏 | 论文排版

姜黄素及其衍生物C086抑制人白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系

余靖  
【摘要】:Hsp90作为分子伴侣,其已确定的客户蛋白超过200个。由于它的许多客户蛋白是细胞增殖信号通路中的重要分子,与肿瘤密切相关,Hsp90已经成为抗肿瘤药物的很有前景的靶点。 姜黄素是一种黄色的多酚化合物,能够阻断多条信号通路而抑制肿瘤的持续生长、侵袭、血管生长和肿瘤转移等多种生物学行为。姜黄素调控的多个分子靶点,如Bcr/Abl、EGFR、Src、Erb-B_2、VEGF和端粒酶也是Hsp90的客户蛋白。本课题组前期研究首次报道,姜黄素抑制K562细胞增殖与下调p210~(Bcr/Abl)有关。姜黄素在使Hsp90/p23与p210~(Bcr/Abl)结合减少,引发p210~(Bcr/Abl)的快速降解的同时,Hsp70/p60~(Hop)与p210~(bcr/abl)的结合增加,这个特征与Hsp90的N端抑制剂GA很相似。提示Cur下调p210~(bcr/abl)蛋白含量是通过干扰Hsp90的分子伴侣功能实现的。 然而姜黄素生物利用度低,限制了其临床应用。人们尝试多种方法试图提高姜黄素的生物利用度。本实验室新合成了姜黄素衍生物C086。本实验试图探讨姜黄素及其衍生物C086对人白血病细胞增殖的影响及其与Hsp90分子伴侣功能的关系。 第一部分姜黄素衍生物C086对人白血病细胞增殖的抑制作用 目的:研究姜黄素衍生物C086抑制人白血病细胞增殖和诱导凋亡的作用及其机制。 方法:⑴MTT法检测C086对细胞增殖的影响;⑵瑞氏-吉姆萨染色观察C086对细胞形态的影响;⑶AO-EB染色观察C086对细胞凋亡影响;⑷免疫荧光检测细胞Bcr/Abl蛋白表达的改变;⑸分光光度法检测Caspase 3和Caspase 9的活性;⑹免疫印迹分析检测细胞Bcr/Abl, Erk_(1/2), p-Erk, Akt, p-Akt, PKC, Raf, C-myc, Src, p-Src, Bcl-2, Bax, Fas, Fasl, Caspase3, Caspase9和p53蛋白表达量;⑺联苯胺染色法检测C086对K562细胞红系分化的影响。 结果:⑴C086可抑制K562、HL-60和HL60(Bcr/Abl)细胞增殖,且活性较Cur明显增强;⑵C086可下调K562、HL-60和HL60(Bcr/Abl)细胞中p-Erk、p-Akt、Pkc、Raf、C-myc、p-Src蛋白含量;⑶C086可下调K562和HL60(Bcr/Abl)细胞中Bcr/Abl蛋白含量;⑷C086可下调K562、HL-60和HL60(Bcr/Abl)细胞中Bcl-2蛋白含量,上调Bax含量;⑸C086诱导K562细胞凋亡,增强细胞中Caspase3和Caspase9活性,上调细胞中Fas、Fasl、Caspase3、Caspase9以及p53蛋白含量;⑹C086诱导K562细胞向成熟红系细胞分化。 第二部分姜黄素及其衍生物C086对白血病细胞中Hsp90分子伴侣功能的影响目的:研究姜黄素及其衍生物C086对白血病细胞中Hsp90分子伴侣功能的影响。方法:⑴免疫印迹分析检测细胞中Hsp90、Hsp70、p23和p60~(Hop)蛋白含量的变化;⑵免疫组化检测细胞中Hsp70表达的改变;⑶Realtime PCR检测药物对细胞中HSP90和HSP70基因mRNA水平的影响;⑷免疫共沉淀检测药物对细胞中Bcr/Abl/Hsp90/Hsp70/p23/p60~(Hop)蛋白结合状态的影响;⑸荧光光谱实验研究药物与异源表达的Hsp90和NHsp90的相互作用;⑹Piper Phosphate Assay Kit检测药物对细胞中Hsp90的ATPase活性的影响。 结果:⑴Cur和C086可以上调K562、HL60和HL60(Bcr/Abl)细胞中Hsp70含量,对细胞中Hsp90、p23和p60~(HOP)含量无明显影响,作用趋势与GA一致;C086可以下调Hsp90含量;⑵C086在mRNA水平上调K562细胞中Hsp70含量,下调K562细胞中Hsp90含量;⑶Cur和C086可使K562、HL60和HL60(Bcr/Abl)细胞中与Hsp90结合的Hsp70增多,与Hsp90结合的p23减少,与Hsp90结合的p60~(HOP)不变;⑷Cur和C086可使K562和HL60(Bcr/Abl)细胞中与Bcr/Abl结合的Hsp70增多,与Bcr/Abl结合的Hsp90、p23减少,与Bcr/Abl结合的p60~(HOP)不变;⑸Cur和C086与异源表达的Hsp90和NHsp90相互作用;⑹Cur抑制Hsp90的ATPase活性。 第三部分姜黄素衍生物C086对K562细胞裸鼠异种移植瘤的作用及相关机制研究 目的:我们建立了K562细胞裸鼠异种移植瘤模型,将在体外研究的基础上继续研究姜黄素衍生物C086在体内是否也产生抗癌作用,并探索其体内作用机制。 方法:⑴皮下注射K562细胞,建立K562细胞裸鼠异种移植瘤模型;⑵将荷瘤裸鼠随机分为四组,分别是生理盐水阴性对照组、C086低剂量组(50 mg/kg)、C086中剂量组(100 mg/kg)和C086高剂量组(200 mg/kg),每组6只裸鼠;⑶观察成瘤情况,比较肿瘤体积;⑷称量离体瘤块质量、计算抑瘤率;⑸摘除眼球取血检测肝肾功能和血电解质;⑹HE染色光镜下观察肿瘤组织的形态结构;⑺免疫荧光检测肿瘤组织Bcr/Abl蛋白表达;⑻免疫印迹检测肿瘤组织中Erk_(1/2), p-Erk, C-myc, Hsp70和Hsp90的蛋白含量。 结果:⑴高剂量C086可以抑制K562细胞裸鼠异种移植瘤的生长,抑瘤率为44.2%;⑵C086对裸鼠肝肾功能以及电解质代谢没有造成不利影响;⑶C086下调K562细胞裸鼠异种移植瘤中Bcr/Abl、Erk_(1/2)、p-Erk、C-myc和Hsp90蛋白含量,上调Hsp70蛋白含量。 结论:本研究首次证明姜黄素衍生物C086抑制人白血病细胞增殖。姜黄素和C086抑制肿瘤细胞增殖的机制可能与阻断Hsp90的分子伴侣功能有关。C086也可以抑制K562裸鼠异种移植瘤的生长。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王建舜,容维祺,康九红;姜黄素对超氧阴离子的清除作用[J];西北国防医学杂志;1999年03期
2 梁华茂,姜洁,孔北华,马道新,江森;γ-干扰素对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响[J];山东大学学报(医学版);2002年04期
3 邱学德,杨宇如,宋建新,李杜渐;姜黄素对膀胱肿瘤细胞株T24和BIU87增殖影响[J];华西医学;2004年02期
4 简燕婷,王继德,麦国丰,张亚历,赖卓胜;姜黄素对肠炎大鼠肠黏膜环氧合酶-2的调控[J];第四军医大学学报;2005年06期
5 于得才;何媛媛;李红英;孔令辉;;HPLC法测定复方姜黄降脂片中姜黄素[J];中草药;2006年02期
6 蔡九妹;廖伟;;姜黄素在心血管疾病中应用的研究进展[J];陕西医学杂志;2009年12期
7 吴桂碧;薄层扫描法测定姜黄中姜黄素的含量[J];华西药学杂志;1995年03期
8 何静,陈燕,吴裕丹,陈文娟;姜黄素对原代急性髓性白血病细胞凋亡及调控蛋白Mcl-1、Bax、Bak表达的影响[J];同济医科大学学报;2001年04期
9 吴勇,陈元仲,许建华,吕联煌;姜黄素对人类Burkitt淋巴瘤抗癌作用的研究[J];中华肿瘤杂志;2002年04期
10 黄俊琼,孙万邦;姜黄素对白血病耐药细胞HL_(60)/ADR的抑制作用[J];中国免疫学杂志;2002年05期
11 鲍华英 ,陈荣华 ,郭梅 ,黄松明 ,费莉 ,黄文彦;实验性肾炎病理改变及姜黄素对其防治作用研究[J];临床儿科杂志;2003年10期
12 高承贤,丁志山,梁冰冰,陈铌铍,程东庆;姜黄素对血管生成影响的实验研究[J];中药材;2003年07期
13 孙春艳,刘新月,陈燕,刘芳,王妍;姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究[J];中国中西医结合杂志;2004年11期
14 刘加军,黄仁魏,林东军,林曲,李铭权,吴祥元,潘祥林,彭军;姜黄素对NB4细胞的增殖抑制作用及其作用机制[J];中国新药与临床杂志;2005年03期
15 沃兴德,丁志山,袁巍,高承贤,洪行球;姜黄素及其衍生物抑制肿瘤作用的实验研究[J];浙江中医学院学报;2005年02期
16 陈朝晖,赵军,肖亚军,肖传国;姜黄素诱导人前列腺癌细胞株PC-3凋亡的研究[J];中华实验外科杂志;2005年04期
17 陈小芬,汤为学,李龙江;姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV_3的抗增殖作用[J];重庆医科大学学报;2005年02期
18 陈宏;张振书;周京旭;陈宇英;丁云霞;张亚历;;姜黄素抗大肠癌和肝癌的基础研究[J];医学研究通讯;2005年12期
19 王青虎,白玉霞,布仁图雅;薄层比色法测定沙日嘎-4汤中姜黄素的含量[J];中国实验方剂学杂志;1998年05期
20 吴裕丹,陈燕,陈文娟,喻东姣,李惠玉;姜黄素对急性髓性白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响[J];同济医科大学学报;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 余靖;刘洋;黄慧卿;吴丽贤;许建华;;姜黄素衍生物C086抗慢性粒细胞白血病的作用与阻断Hsp90伴侣功能的关系[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
2 于长安;温见燕;廖福龙;;剪应力与姜黄素联合作用对人脐静脉内皮细胞功能的影响[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
3 陈秀;李作孝;佟琳;陈忠伦;张琳;彭建一;;姜黄素对实验性脑出血肿周边含水量影响的研究[A];第五次全国中西医结合神经科学术会议论文集[C];2004年
4 杨磊;张建业;张莲英;;姜黄素对前列腺肿瘤细胞生长的抑制作用[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 成扬;平键;徐列明;胡义扬;刘成海;;姜黄素激活过氧化物酶体增殖因子活化受体γ信号对大鼠肝星状细胞的影响[A];第二十次全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2008年
6 李莉;赵昱;龚淼;;姜黄素对人食管癌Ec-109细胞作用的体外实验研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
7 廖华;孙爱军;张红旗;;姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞周期和增殖能力的影响[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
8 曹健美;胡义扬;刘成海;王晓柠;;姜黄素对LPS诱导KC炎症细胞因子分泌的抑制作用及其对肝细胞损伤的影响[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
9 李军祥;诸葛丽;;姜黄素和葛根素干预非酒精性脂肪性肝炎作用机制的对比研究[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年
10 潘国凤;张晓东;朱晓新;;姜黄素抗肿瘤作用及其机制研究最新进展[A];第十届全国中药药理学术会议论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 余靖;姜黄素及其衍生物C086抑制人白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系[D];福建医科大学;2011年
2 郑斌;姜黄素及其类似物L3的抗氧化活性和对小鼠糖尿病模型及血管并发症影响的研究[D];福建医科大学;2010年
3 任玥欣;姜黄素对胆盐诱导的急性胰腺炎防治作用的应用基础研究[D];第一军医大学;2004年
4 王蓬文;姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用[D];北京中医药大学;2011年
5 吴雪梅;姜黄素新剂型:自乳化和亚微乳给药系统的研究[D];福建医科大学;2010年
6 刘红军;姜黄素对膀胱癌细胞株T24 miRNA表达谱的影响及其机制的探讨[D];广西医科大学;2011年
7 鲍华英;姜黄素对增殖性肾炎防治作用的实验研究及其机制探讨[D];南京医科大学;2003年
8 张文俊;(I)姜黄素半互穿式羟丙甲纤维素—明胶微球给药系统的研究(II)OX26-NGF-融合蛋白的基因克隆及其表达纯化[D];天津大学;2010年
9 崔群力;姜黄素对多巴胺能细胞的保护作用及其机制的实验研究[D];华中科技大学;2010年
10 周京旭;姜黄素对亚硝胺诱导的大鼠肝癌的化学防护作用研究[D];第一军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 魏小娣;姜黄素对新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的疗效评价及其机制的研究[D];重庆医科大学;2010年
2 安伟;姜黄素对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[D];山东大学;2010年
3 孙玉;依那普利联合姜黄素对实验性肝纤维化小鼠肝脏的保护作用及机制[D];河北医科大学;2010年
4 陈玲玲;凋亡诱导因子在姜黄素诱导的大鼠肺成纤维细胞凋亡中的作用[D];南京医科大学;2011年
5 张秀红;依那普利联合姜黄素对防治小鼠肝纤维化效果及机制研究[D];河北医科大学;2010年
6 宫亮;姜黄素Ⅲ脂质体制备及其对肺癌细胞A549生物学特性的影响[D];第三军医大学;2004年
7 李帆;姜黄素对阻断NF-κB信号通路抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖[D];第四军医大学;2010年
8 周进伟;姜黄素对肿瘤细胞中β3Gn-T8及其相关基因表达的影响[D];苏州大学;2010年
9 许娇红;酪氨酸激酶抑制剂筛选方法的建立及姜黄素衍生物的筛选[D];福建医科大学;2010年
10 沈雪;姜黄素对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和凋亡影响的实验研究[D];中南大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 高原;研究发现姜黄素能延长动物寿命[N];新华每日电讯;2010年
2 张骁束 梅英;姜黄素抗癌作用研究进展[N];中国医药报;2003年
3 肖瑶;姜黄素有明显抗肿瘤作用[N];健康报;2008年
4 ;姜黄素对肾脏有保护作用[N];中国中医药报;2004年
5 ;食用天然色素简介——姜黄素[N];中国食品质量报;2004年
6 ;姜黄素有可能预防阿尔茨海默病[N];医药经济报;2005年
7 印高乐;吃姜黄素食物有助预防口腔癌[N];中国中医药报;2003年
8 记者 冯磊 通讯员 毛平;中国中西医结合学会 科技奖颁发[N];中国中医药报;2010年
9 乃卫 冷文 刘国应;国际医药动态[N];中国医药报;2000年
10 程书权 姜黄素;中药及其活性成分治疗肝病的现代研究[N];中国中医药报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978