收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

碱性成纤维细胞因子对皮肤干细胞神经分化影响的研究

方碧清  
【摘要】:目的:探讨表皮干细胞向神经细胞分化的影响因素。 方法: 1.分离3-4天的SD大鼠表皮基底层细胞,利用10分钟贴壁法分离出表皮干细胞。2,用免疫组织化学法测定K15、β1整合素、CD34和巢蛋白(nestin)来鉴定培养出的表皮干细胞。3.加入不同的培养基:K-SFM、NEUROBASALTM-A和DMEM培养分离出的表皮干细胞,并观察不同培养基组细胞形态的变化。4.通过调整不同浓度的bFGF,观察表皮干细胞的形态变化。5.用K-SFM为培养基培养表皮干细胞,以表皮干细胞的细胞密度分组,分为0.5×10~7/ml组、0.3×10~7/ml组、0.1×10~7/ml组、0.5×105/ml,每组均加入20ng/ml的bFGF,观察其细胞形态发生以及细胞标记物的改变。 结果: 1.利用十分钟贴壁法成功分离出表皮干细胞。分离出来表皮干细胞细胞密度大,细胞呈圆形或多角形,细胞形态清晰,胞质均匀,可见有核分裂细胞,核质比例大,其特征性标记分子K15及β整合素表达阳性。 2.表皮干细胞在NEUROBASALTM-A和DMEM培养基中均出现细胞体积增大,细胞膜边界不清,细胞核溶解、核碎裂、细胞死亡。 3.表皮干细胞在K-SFM培养基中,加入bFGF的浓度为0ng/ ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml时,细胞形态没有明显改变,呈圆形或多角形,细胞形态清晰,胞质均匀,可见有核分裂细胞,核质比例大;当加入的bFGF浓度为20ng/ml时, 24h即可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第3-4天可看到部分细胞呈铺路石样,细胞体积增大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,极少部分细胞呈现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞消失,部分铺路石样细胞形成克隆,细胞90%融合。 4.在0.3×10~7/ml组和0.1×10~7/ml组, 24h-48h可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第5-6天可看到部分细胞呈铺路石样改变,细胞体积大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,部分细胞呈出现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞增多。免疫组织化学nestin、NSE染色阳性,β1整合素、CD34染色阴性; 0.5×10~6/ml组,约3-4天后可见到散在的伸展,呈多角形、圆形或短棒样的细胞,大部分细胞一直未伸展; 0.5×10~7/ml组, 24h即可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第3-4天可看到部分细胞呈铺路石样,细胞体积增大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,极少部分细胞呈现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞消失,部分铺路石样细胞形成克隆,细胞90%融合。 结论 1.10分钟快速贴壁法可以培养出表皮干细胞,表皮干细胞的特征性标记分子K15及β1整合素表达阳性,CD34、nestin表达阴性。 3.培养表皮干细胞细胞的最佳培养基为K-SFM。 4.通过bFGF可诱导表皮干细胞向神经系分化,bFGF对表皮干细胞的诱导具有细胞密度依赖性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈东来,庞晓纲;表皮干细胞的生物学特性与临床应用研究进展[J];中国美容医学;2005年05期
2 黄晖,赖西南,王正国,王丽丽,陈志雄;感觉神经肽P物质在表皮干细胞分化中作用的实验研究[J];中华烧伤杂志;2004年05期
3 高艳红,裴雪涛;皮肤干细胞的研究现状与应用前景[J];中华烧伤杂志;2003年01期
4 刘虎仙;贾赤宇;付小兵;谢晓繁;;表皮干细胞来源、分布及其在创面愈合中的作用[J];中华创伤杂志;2006年03期
5 付国强;人类毛囊膨胀部细胞具有生化特性和表皮干细胞的表型[J];国外医学.皮肤性病学分册;2001年02期
6 牛云飞,路卫,夏照帆;表皮干细胞的分离及鉴定[J];第二军医大学学报;2004年08期
7 田田;李英春;;胚胎干细胞源性表皮干细胞的研究进展[J];组织工程与重建外科杂志;2008年04期
8 刘洋;李建福;付小兵;孙同柱;郭建军;李海红;;压应力对体外培养的表皮干细胞增殖分化的影响[J];中国病理生理杂志;2006年05期
9 赵喜彬;杨松林;;表皮干细胞用于瘢痕治疗的研究进展[J];组织工程与重建外科杂志;2009年06期
10 李富;付小兵;刘文忠;;人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展[J];感染.炎症.修复;2008年04期
11 牛云飞,路卫,夏照帆,张步涛,韦多,田建广,程大胜;表皮干细胞在人体不同部位皮肤的分布差异[J];第二军医大学学报;2004年09期
12 王小兵;王晓健;张宝林;;创伤愈合中bFGF bFGF受体的研究进展及其对表皮干细胞的影响[J];山西医药杂志;2007年07期
13 耿松梅;表皮干细胞研究新进展[J];中国皮肤性病学杂志;2002年03期
14 程大胜 ,夏照帆,唐洪泰,田建广,王皓;一种表皮干细胞检测方法的建立[J];解放军医学杂志;2003年06期
15 李建福,付小兵,盛志勇,孙同柱;创面愈合过程中创缘表皮干细胞的再分布[J];中华医学杂志;2003年03期
16 向启利;李建福;;表皮干细胞及其信号通路的研究进展[J];感染.炎症.修复;2006年02期
17 周彪;王凌峰;;表皮干细胞的特征与烧伤创面修复的研究进展[J];中国冶金工业医学杂志;2007年02期
18 董蕊,金岩,刘源,赵宇,王容;表皮干细胞在成人及胎儿不同部位皮肤中的比较研究[J];第四军医大学学报;2003年18期
19 林京玉,丁日高,应翔宇;表皮干细胞增殖与分化的分子调控研究进展[J];军事医学科学院院刊;2003年04期
20 谢举临,利天增,祁少海,卞徽宁,成建定,徐盈斌,梁慧珍;烫伤大鼠不同深度创面组织中表皮干细胞分布的初步研究[J];中华烧伤杂志;2003年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王冰梅;葛香连;林程琳;宋颖楠;张彦定;;诱导人表皮干细胞向成釉质细胞分化[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
2 张杨;李秀兰;华云旗;;表皮干细胞与毛囊干细胞生物学特性比较[A];第十五次全国中西医结合疡科学术交流会论文汇编[C];2011年
3 李孝建;沈雁;张志;曾耀英;李延仓;杨小红;;鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
4 朱飞滨;刘德伍;张红艳;彭燕;钟清玲;李勇铁;;P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合与神经再生[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
5 白晓智;张战凤;赵周婷;蔡维霞;石继红;汤朝武;朱雄翔;胡大海;;热损伤后表皮细胞培养上清诱导脂肪干细胞向表皮干细胞表型转分化的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
6 陶克;陈璧;丁国斌;谢松涛;王洪涛;胡大海;;联合应用3-甲基-1-异丁基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松对人胎儿表皮干细胞的诱导分化作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 钟清玲;刘繁荣;刘德伍;;表皮干细胞向皮肤附件诱导分化研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
8 谢晓繁;刘虎仙;付小兵;贾赤宇;;表皮干细胞分离和鉴定的研究进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
9 彭燕;彭青;蔡爱英;刘德伍;钟清玲;蓝蔚;;表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
10 廖立新;陈刚泉;李国辉;李剑;;以表皮干细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 尹德龙;表皮干细胞在不同外界因素下对其生物学特性的影响及机制研究[D];华中科技大学;2012年
2 王联群;hTERT基因在人表皮干细胞中的表达与调控研究[D];南昌大学;2010年
3 李美蓉;表皮干细胞多向分化潜能特征的发现及其相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 李孝建;鼠表皮干细胞培养体系及构建组织工程皮肤的研究[D];暨南大学;2009年
5 纪世召;模拟干细胞Niche同步实现表皮干细胞扩增与皮肤替代物构建的实验研究[D];第二军医大学;2012年
6 韩军涛;胎鼠表皮干细胞的体外分离培养及其在表皮和毛囊再生中的作用[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 李娟;Kruppel样因子4(KLF4)在小鼠表皮干细胞中的表达和功能研究[D];华中科技大学;2011年
8 李力;生物电场促进皮肤创面修复的细胞机制[D];第三军医大学;2012年
9 钟清玲;糖尿病大鼠表皮干细胞β-catenin和cyclinD1的表达及其在创面修复中的作用研究[D];南昌大学;2011年
10 赵志力;去分化表皮细胞重获再生表皮能力的研究[D];第三军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 方碧清;碱性成纤维细胞因子对皮肤干细胞神经分化影响的研究[D];福建医科大学;2011年
2 杨青;毛囊干细胞和表皮干细胞生物学特性的比较研究[D];天津医科大学;2012年
3 陈萌;免疫荧光双标法应用于小鼠表皮干细胞分子标记的筛选[D];山东大学;2011年
4 詹日兴;一氧化氮在烧伤后表皮干细胞离巢迁移中作用的实验研究[D];第三军医大学;2012年
5 李云剑;培养基血清浓度对人表皮干细胞增殖分化的影响[D];南京医科大学;2010年
6 陈兰;龟板有效成分对胎鼠表皮干细胞凋亡的影响[D];广州中医药大学;2011年
7 朱飞滨;P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合与神经再生的实验研究[D];南昌大学;2011年
8 陈季玲;急性β射线皮肤损伤创面及其表皮干细胞变化的实验研究[D];南华大学;2012年
9 孙薇;P311促进烧伤创面表皮干细胞迁移的实验研究[D];第三军医大学;2012年
10 李欣;不同条件下银屑病患者表皮干细胞分离、培养、鉴定及生物学特性的初步研究[D];山西医科大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张献怀;我国创伤修复研究取得新进展[N];中国医药报;2009年
2 张献怀;我国创伤修复研究和临床治疗获新进展[N];大众科技报;2009年
3 刘霞;科学家在毛囊中发现“皮肤干细胞之母”[N];科技日报;2010年
4 张献怀;我国创伤修复研究和临床治疗取得新进展[N];科技日报;2009年
5 记者 涂端玉 通讯员 陈景荣 钟志勇;巨型老鼠体内注有马骝基因[N];广州日报;2007年
6 记者 邰举;韩从伤口组织提取皮肤干细胞获成功[N];科技日报;2009年
7 记者 白毅;我学者揭示皮肤干细胞衰老新机制[N];中国医药报;2011年
8 记者 施嘉奇 通讯员 王姿英;探索中药对干细胞分化的作用[N];文汇报;2009年
9 张献怀;创伤修复研究发现三种生物学现象[N];健康报;2009年
10 王姿英;中英合作中药调控干细胞分化研究启动[N];中国医药报;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978