降纤酶对脊髓损伤后血管内皮生长因子的表达及细胞凋亡的影响

【摘要】：目的通过观察降纤酶对大鼠急性脊髓损伤后不同时间点血管内皮生长因子(VEGF)的表达及局部脊髓组织细胞凋亡的影响,探索急性脊髓损伤后VEGF表达水平与细胞凋亡的情况,了解VEGF表达水平和神经功能恢复之间的关系,从而初步探讨降纤酶在脊髓损伤中的作用及其机制,为临床应用降纤酶治疗脊髓损伤提供新理论依据。 方法雌性SD大鼠90只,体重250～300g。随机分为假损伤组(假手术组)、单纯脊髓损伤组(对照组)、脊髓损伤+降纤酶干预组(干预组),每组各30只。所有大鼠行T12节段椎板切除开窗,暴露脊髓,其中假手术组只打开椎板,不打击脊髓,假手术组和干预组按改良Allen’s法以10g×6cm力撞击脊髓,制作大鼠急性脊髓损伤模型,各组分别于伤后1d、3d、5d、7d、14d、28d进行BBB评分,并于各个时间点随机处死5只,损伤部位取材,HE染色、VEGF、细胞凋亡免疫组化染色及在光镜下观察、计算VEGF阳性细胞数及凋亡细胞数。分别对对照组及干预组各时间点VEGF阳性细胞数和凋亡细胞数进行组间、组内比较,并对对照组VEGF阳性细胞数和凋亡细胞数进行相关性分析。数据用SPSS16.0统计软件进行分析。 结果假手术组的BBB评分为21分,对照组、干预组与假手术组相比,在各时间点评分明显降低,而干预组在5d及之后的各时间点BBB评分明显高于对照组(P0.05),尤其7d、14d、28d时间点两组有显著性差异(P0.01)。VEGF免疫组化结果:假手术组显示脊髓中央管周围和脊髓软脊膜见少量VEGF表达,其它部位未见表达;脊髓损伤后,对照组VEGF在脊髓损伤及损伤周边区高表达,5d达高峰,7d、14d表达仍较明显,28d见少量表达。干预组各时间点VEGF的表达和对照组相比明显增加(P0.05),其中3d、5d、7d、14d时间点差异显著(P0.01)。TUNEL法标记凋亡细胞情况:假手术组各时间点凋亡细胞少见,对照组和干预组较明显,凋亡细胞主要是神经元细胞和少突胶质细胞。凋亡细胞在脊髓损伤后逐渐增多,1d达高峰,3d、5d仍较多,7d、14d、28d仍有表达;干预组1d、3d、5d、7d、14d、28d凋亡细胞数较对照组明显减少(P0.05),其中3d、5d、7d时间点差异显著(P0.01)。对对照组1-5d时间点VEGF阳性细胞数与凋亡细胞数做相关性分析得出,单纯脊髓损伤后1-5dVEGF阳性细胞数和细胞凋亡数呈负相关关系(相关系数r=-0.90052,P0.05)。 结论:①急性脊髓损伤后VEGF参与脊髓损伤后继发性病理改变的过程,特别是早期阶段。②急性脊髓损伤后较长时间内存在着继发性细胞凋亡现象,其进一步加重了脊髓损伤。③VEGF的表达可减少急性脊髓损伤后继发性细胞凋亡,与继发性脊髓损伤的发生发展关系密切。④降纤酶可能通过促进VEGF的表达减少细胞凋亡而对急性脊髓损伤起治疗作用。