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HTK液改良液氮深低温保存法对大鼠带瓣管道活性的影响

徐帆  
【摘要】:目的:观察HTK液对液氮深低温保存法进行改良后大鼠带瓣管道活性的的变化并探讨其作用机制。 方法:将SD大鼠随机分成7组,取下主动脉带瓣管道,(1)对照组(controlgroup):带瓣管道不经灭菌孵育直接进行各项指标的检测。(2)实验组A:带瓣管道置于含有RPMI1640培养基和抗生素的无菌标本瓶中4℃灭菌孵育24小时。(3)实验组B:带瓣管道置于含有半量RPMI1640培养基,半量HTK液及抗生素的无菌标本瓶中4℃灭菌孵育24小时。(4)实验组C:带瓣管道置于含有HTK液和抗生素的无菌标本瓶中4℃灭菌孵育24小时。(5)实验组D:采用实验组C的方法灭菌24小时后,将带瓣管道置于含有70%RPMI1640培养基+20%胎牛血清+10%DMSO的冻存液中深低温冻存6个月。(6)实验组E:采用实验组C的方法灭菌24小时后,将带瓣管道置于含有35%RPMI1640培养基+35%HTK液+20%胎牛血清+10%DMSO的冻存液中深低温冻存6个月。(7)实验组F:采用实验组C的方法灭菌24小时后,将带瓣管道置于含有70%HTK液+20%胎牛血清+10%DMSO的冻存液中深低温冻存6个月。对各实验组的带瓣管道进行细菌学、细胞活性、组织学检测,并对实验组C、D、E、F实验前后α-酮戊二酸含量进行检测。 结果:各实验组带瓣管道均未检出细菌及真菌。在灭菌孵育期间中,除对照组之外,实验组C带瓣管道的细胞活性保存最好,细胞外基质结构保存最完整,灭菌孵育期间α-酮戊二酸含量随时间的延长进行性下降。在深低温冻存期间,各实验组的带瓣管道保存效果无明显差别。 结论:采用HTK液对液氮深低温保存法进行改良,能提高大鼠带瓣管道在灭菌孵育期间细胞活性及细胞外基质结构的保存效果。其主要机制是在灭菌孵育期间,HTK液中的组氨酸缓冲对能有效维持细胞内外环境的稳定,色氨酸及酮戊二酸作为能量底物,对缺血状态下的带瓣管道提供能量。而在深低温冻存期间,由于细胞代谢趋于停滞,HTK液的保护机制不能充分体现,组织的保存效果主要取决于冷冻保护剂及冷冻速率的控制。


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