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曲霉菌胞壁及胞外多糖的分离和纯化

黄尔  
【摘要】:【目的】 半乳甘露聚糖(galactomannan,简称GM)存在于曲霉菌胞壁,且在曲霉菌生长过程中会释放至外液。GM已作为诊断侵袭性曲霉菌感染的标志物,而现有的检测方法存在诸多局限性,本研究目的从烟曲霉菌中提取纯度高、分子量均一的GM,为进一步建立基于GM检测的侵袭性曲霉菌感染诊断新技术奠定基础。 【方法】 1.选取温度为A因素、通气量为B因素、接种量为C因素,各取3个水平,以菌体生成量和胞外多糖产量为指标进行正交实验,通过分析选取最优培养条件。 2.收集烟曲霉发酵液,通过浓缩、醇沉、抽滤、透析、冻干等步骤得到粗多糖,再将粗多糖行去蛋白、过柱等纯化步骤处理,得到多糖P1;采用碱裂解菌丝体,经过离心、浓缩、透析、冻干等步骤得到粗多糖,经conA sepharose4B亲和层析填料纯化,加入葡聚糖酶,得到多糖P2。 3.采用TOSOH TSK gel3000PWxl柱子,分析多糖的纯度;高效凝胶色谱法测定标准品右旋糖酐分子量,并制成标准曲线,计算出待测多糖分子量。 4.用三氟乙酸催化多糖水解成单糖,采用硅胶薄层层析法初步分析多糖的单糖组分;继而用三甲基硅咪唑和醋酸酐将单糖衍生化,使之成为易挥发、对热稳定的衍生物,采用气相色谱法进一步分析单糖的种类和比例。 【结果】 1.通过正交试验分析,培养温度28℃、通气量150ml,接种量为5%时,曲霉菌的生长状态最好,得到的胞外多糖量和菌丝体量分别为初始条件的1.151倍和1.273倍。 2.经过一系列纯化步骤,得到1.58g的胞外多糖P1,纯度达94.7%;162.7mg胞内多糖P2,纯度为96.0%;高效凝胶色谱法分析,胞外多糖分子量均一,分子量在21kd左右,而胞内多糖的分子量不均一。 3.硅胶薄层色谱法初步分析,P1、P2多糖的单糖组分均为半乳糖和甘露糖。通过气相色谱分析,P1的半乳糖与甘露糖的比例为1:1.18。 【结论】 本实验成功地从烟曲霉菌的胞外发酵液中分离到纯度高、分子量均一的半乳甘露聚糖,分子量和单糖组成与文献报道一致,基本符合适配子筛选的要求,可以用于本科题组研制新的检测方法。而胞壁的多糖分子量不均一,结构较复杂,有待于进一步深入研究。


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1 张光林;鸡曲霉菌病诊断与治疗[N];中国畜牧兽医报;2008年
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