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三种不同途径移植BMSCs对脊髓损伤后脊髓及小胶质细胞功能影响的研究

康健  
【摘要】:目的:分离、培养及鉴定SD大鼠BMSCs,建立研究SD大鼠T10脊髓钳夹损伤模型,观察经局部移植、尾静脉移植、蛛网膜下腔移植骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)对SD大鼠脊髓损伤后脊髓及小胶质细胞的功能影响。 方法:1、采用全骨髓差速贴壁生长分离法培养BMSCs。通过向成骨、成脂及流式细胞仪检测表面标志物CD29、CD34、CD45和CD90的表达来鉴定BMSCs。2、应用钳夹法制备SD大鼠T10脊髓损伤模型,建立(1)空白对照组;(2)脊髓损伤BMSCs非移植组(再分为10组:术后6h组、12h组、24h组、72h组、1天组、3天组、7天组、14天组、21天组和28天组);(3)脊髓损伤BMSCs移植组:每组又分为3组:局部移植组,尾静脉移植组,蛛网膜下腔移植组(每组再分为10组),每组5只,共205只。术后5小时对移植组注射BMSCs悬液。观察各组术后大鼠BBB评分;应用免疫组织化学方法,观察各组术后脊髓损伤区OX-42标记的小胶质细胞变化;利用ELISA观察各组术后6h、12h、24h、72h脊髓损伤处IL-1β含量变化。 结果:(1)通过全骨髓差速贴壁法分离、培养的大鼠骨髓间充质干细胞在体外可进行传代、扩增。经流式细胞仪检测证实分离培养所得细胞为骨髓间充质干细胞。(2)用钳夹法制作大鼠SCI模型后,SD大鼠出现典型的截瘫症状。(3)BBB评分:移植后1周内无明显差异(p0.05)。2周后,局部移植组和静脉移植组无明显差异(p0.05),蛛网膜下腔移植组与局部移植组、静脉移植组差异明显(p0.05)。(4)免疫组织化学染色发现,3天时OX-42阳性细胞数目达峰值。对照组和移植组各时段平均OX-42阳性细胞数均显著高于空白对照组(P0.05)。与对照组相比较,移植组各时段平均OX-42阳性细胞数显著降低(P0.05)。蛛网膜下腔移植组较其他移植组小胶质细胞免疫阳性产物有明显差异(p0.05)。移植组IL-1β平均含量在损伤后6h、12h、24h及72h低于对照组(P0.05)。 结论:(1)移植组BBB评分显示其功能恢复有稳定的上升趋势。三种移植途径均对脊髓损伤的治疗有一定的作用且蛛网膜下腔组效果较好。(2)BMSCs可抑制脊髓损伤后小胶质细胞活化及炎性因子IL-1β表达,从而减轻免疫炎症反应,且蛛网膜下腔移植组的效果要好于局部移植和静脉移植组。


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