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浒苔多糖提取技术和分离纯化条件以及调节血脂作用研究

黄斌  
【摘要】:目的: 研究浒苔多糖(enteromorpha polysaccharide EP)的分离纯化条件和结构特点;比较不同提取方法对浒苔多糖得率及活性基团的影响;研究不同提取方法得到的浒苔多糖(EP)调节血脂及抗脂质过氧化作用,并探讨其可能机制。 方法: 1、以福建地区所产的浒苔为研究对象,用分光光度法,比较热水提取、超声波提取、微波提取、酶法提取以及联合不同方法提取对浒苔多糖得率及多糖中糖醛酸和硫酸根含量。 2、采用二乙氨基乙基纤维素(DEAE-cellulose)和Sephadex-100凝胶分离纯化浒苔多糖,用红外线光谱分析结构,用气相色谱分析单糖组成。 3、高脂饲料喂养,建立高血脂大鼠模型,分别采用酶法提取的EP和超声波提取的EP干预40天,检测血脂水平和抗氧化指标;HE染色观察肝脏结构;逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定肝脏组织中的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(Lact)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr)和三磷酸腺苷结合盒A1(AbcA1)mRNA的表达水平。 结果: 1、浒苔多糖提取方法比较 在单一的提取方法,以酶法的EP提取量较高。联合两种方法的提取量较单一方法高,联合三种方法的提取量较两种方法高。但是不能增加单位多糖中糖醛酸和硫酸根的提取量。 2、浒苔多糖的分离纯化条件和结构特点 提取的浒苔多糖,经DEAE纤维素分离得到4个组分,分别为EP1、EP2、EP3、EP4,其中EP2占所回收多糖的比例达81%,EP2经Sephadex-100分离,时呈现单一对称峰。红外线光谱分析显示,EP2为糖类化合物,且有硫酸酯结构;经气相色谱检测显示,EP2由鼠李糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖和半乳糖组成,各种单糖的比例为5.12:1.32:3.38:1.62:1:1.03。 3、调节血脂及抗脂质过氧化作用结果。 3、1血脂指标 与空白组(BCG)比较,模型组(MG)血清TC、TG、LDL-C较低,HDL较高,差异具有统计学意义(P<0.05);与MG比较酶提取高剂量组(EHEP)、酶提取中剂量组(EMEP)、酶提取低剂量组(ELEP)、超声波提取高剂量组(UMEP)、超声波提取低剂量组(ULEP)的TC、TG较低,差异有统计学意义(P<0.05)。在TC指标上ELEP比ULEP低,EMEP比UMEP低,EHEP比UHEP低,差异无统计学意义(P>0.05);在TG指标上ELEP比ULEP低,EMEP比UMEP高,EHEP比超声波提取高剂量组(UHEP)低,差异无统计学意义(P>0.05);ULEP和ELEP的HDL同MG相比较高,差异具有统计学意义(P<0.05);同阳性对照组比较,干预组的TG较阳性组(CG)更低,差异有统计学意义(P<0.05)。 3、2抗氧化指标 与空白组(BCG)比较,MG的SOD、 GSH-Px较低,差异有统计学意义(P<0.05);EHEP、EMEP、ELEP、UHEP、UMEP、ULEP和CG的SOD较MG高,差异有统计学意义(P<0.05);EHEP、EMEP、ELEP、UHEP、UMEP、ULEP的GSH-Px较MG高,差异有统计学意义(P<0.05),在SOD指标上上ELEP比ULEP高,EMEP比UMEP高,EHEP比UHEP高,差异无统计学意义。在GSH-PX指标上ELEP比ULEP低,EMEP比UMEP低,EHEP比UHEP低,差异无统计学意义。 3、3病理指标 大鼠肝脏切片显示空白组肝细胞及结构正常;模型组脂肪肝症状明显;阳性对照组及各个浒苔多糖的处理组脂肪肝病理症状较模型组有所减轻,其中CG和酶与超声波提取的EP的中、低剂量组效果较好。两种EP多糖在相同剂量时对高血脂减缓程度的效果相近。 3、4肝脏LactmRNA、Hmgar和AbcA1mRNA的表达 与模型组比较,EHEP组肝脏LactmRNA的表达量较高,差异有统计学意义;其他剂量组同模型组间无显著性差异,但阳性对照组较模型组有明显升高的趋势,在相同剂量组上,酶提取EP组的表达量要高于超声波提取EP组。各个剂量组Hmgar的表达方面在统计学上无显著性差异,但各个干预组Hmgar的表达较其他组有明显升高的趋势,高剂量和低剂量的酶处理组hmgcr基因表达趋势上要高于超声波处理组,中剂量的酶处理组基因表达趋势上要低于超声波EP组。AbcA1mRNA的表达在各个处理中之间无显著性差异。 结论: 1.不同提取方法联合采用能增加EP的提取量,不同的提取方法对EP的活性基团有影响。 2.EP的主成分为EP2,EP2是一种含有硫酸酯的复合多糖。 3. EP具有调节血脂代谢作用 3.1两种浒苔多糖均能够调节高血脂大鼠体内血脂的代谢,提高大鼠机体抗氧化应激的能力,能修复受损肝细胞,起到减轻脂肪肝的作用。 3.2浒苔多糖能够适当调节肝脏中Lact、Hmgcr的表达,达到调节血脂、胆固醇代谢,从而达到降血脂的作用。 3.3酶提取的浒苔多糖降血脂略优于超声波提取的多糖,但差异不大。抗氧化效果方面两者各有优点。


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