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NeuroD1在胃神经内分泌癌中的表达与功能研究

谢鸿腾  
【摘要】:目的:本研究通过转录组测序技术探索胃神经内分泌癌(GNEC)的转录组学景观,并以GNEC特异性上调表达的Neuro D1为焦点,探讨其在GNEC中的表达及其对GNEC生物学功能的影响。方法:本研究采用新一代高通量测序技术RNA-seq对研究的组织样本进行转录组测序;采用RT-qPCR和western blot技术分别检测Neuro D1的m RNA和蛋白表达情况;采用免疫组化法检测Neuo D1在50例GNEC患者石蜡组织切片中的表达情况并做相关的预后分析;采用CCK8法和SRB法检测细胞的增殖能力;采用平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果:(1)本研究共检测了3对GNEC患者的癌与毗邻癌旁组织以及与3例GNEC临床基本状况(性别、年龄、肿瘤分期)相匹配的3例胃腺癌(GAC)患者的癌组织的转录组学信息,并对其转录组景观进行展示;通过比对GNEC癌与癌旁以及GNEC癌与GAC癌的差异表达基因,得出GNEC特异性表达的上调基因1248个,下调基因6个;并对差异表达基因进行了GO等分析。(2)Neuro D1是GNEC特异性上调表达基因之一,其参与神经与神经内分泌相关的多个进程;Neuro D1在GNEC中的m RNA水平和蛋白水平均呈高表达状态,且在50例的免疫组化结果中还发现Neuro D1高表达影响GNEC患者的预后;我们随后对Neuro D1在GNEC中的功能进行了探索,发现敲弱Neuro D1在GNEC细胞系中的表达会促进细胞的增殖与克隆形成,且会提高GNEC细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。结论:GNEC的转录组学景观存在组织特异性,其特异性表达基因Neuro D1不仅影响GNEC患者的远期预后且也会影响GNEC细胞的增殖和克隆形成能力以及对5-Fu的敏感性。


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