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幽门螺杆菌耐药分析及对甲硝唑耐药的分子机制

林辉  
【摘要】: 目的:1.分析福建省幽门螺杆菌(H.pylori)对抗菌素的耐药率,以指导临床用药。2.探讨rdxA(HP0954)基因在幽门螺杆菌对甲硝唑耐药机制中的作用。3.研究致病岛中cagA基因的状态与幽门螺杆菌对甲硝唑耐药之间的关系。 方法:1.在我院内镜中心就诊的不同地区病人中,随机收集快速尿素酶试验(RUT)阳性的病人(51例),取胃窦部粘膜一块,在体外微需氧培养。甲硝唑耐药率检测分别用临界点药敏法(MIC大于8mg/L为耐药)和E试验,克拉霉素、阿莫西林和四环素只用E试验法。2.PCR扩增rdxA基因片断(886bp)并测序。对耐药株和敏感株的rdxA基因序列与标准菌株H.pylori26695相应序列进行同源性分析。3.随机选取5株对甲硝唑高度耐药的菌株(MIC大于256mg/L),分别接种于不含甲硝唑及含有甲硝唑16mg/L的培养皿中。半定量RT-PCR法检测rdxA基因的表达,gale基因(HP0360,已经证实该基因与H.pylori的耐药无关)作为对照。4.扩增H.pylori的cagA基因,对耐甲硝唑菌株和敏感菌的cagA基因的阳性率进行统计学分析。 结果:1.从51例快速尿素酶试验(RUT)阳性的病人中分离出 H.rrlori临床分离菌47株(培养成功率为92.2知。甲硝哩用E试验法 检测耐药率为34叭16竹7入临界点药敏法为31.9义两者差别无统计学 意义。克拉霉素耐药率为10.6叭5竹7),而阿莫西林和四环素则未发现 耐药。2.我们共测序15株H.pylon耐药菌和8株敏感株的rdxA基 因片断。与标准茵株H.Pylon26695相应序列对比,15株耐药茵*ti’) 的rdxA基因核酸序列相似性范围在90阶95%之间,平均为92.5丸而8 株敏感株加tZ’)相似性范围在 94个95%之间,平均为 94.5队正常不同 H.pylon菌株之间基因序列碱基差异性约为5知.大多数耐药株rdxA 基因的变异为点变异、单个碱基插入或缺失,未发现大片段序列的插入 和缺失,且突变位点是不固定的.3.五株高度耐药菌*t z勺的 rdxA基 因在甲硝哇存在的情况下表达量减少,而对照galE基因表达量无变化。 4.H.pylon敏感株(Mtz’)cagA基因的阳性率为SO.6%(25/31),耐药株 mt z s) cagA基因的阳性率为80叭12/15)。两者之间的差别无统计学 意义(P>0.05)。 结论:二.福建省幽门螺杆菌对抗菌素的耐药率为:甲硝哩为34兄 克拉霉素为 10.6仇阿莫西林和四环素则未发现耐药。2.在耐甲硝哩的 大多数幽门螺杆菌临床分离菌中rdxA基因发生多处点变异,单个碱基 插入或缺失,但大片断序列的插入和缺失末发现,且变异位点是不固 定的。3.rdxA基因的表达减少在幽门螺杆菌对甲硝哇高度耐药形成中 起了一定的作用。4.幽门螺杆菌对甲硝哇的耐药性与致病岛中的阴gA 基因的状态没有相关性。


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