激光心脏瓣膜成形+内皮细胞种植的离体研究

【摘要】： 目的： 风湿性心脏瓣膜病是常见的心脏疾病之一，目前对风湿性心脏瓣膜病的治疗手段主要是瓣膜置换，包括机械瓣膜置换和生物瓣膜置换。但它们同时有一些难以避免的缺点，如生物瓣的衰退、机械瓣的术后终生抗凝、抗凝不当导致的出血及血栓形成等并发症。因此目前主张对于通过成形手术能恢复功能的瓣膜应尽力保留。我们此研究就是探索一种新的瓣膜成形方法：用激光对病变心脏瓣膜进行成形，然后在成形后的心脏瓣膜表面种植内皮细胞，以促进心脏瓣膜的正常修复。 材料及方法： (一)、材料： 1、细胞培养设备 2、Nd：YAP激光 3、扫描电镜及透射电镜 4、体外循环装置 5、心脏瓣膜(术中取自风湿心脏瓣膜病患者) (二)、方法： 内皮细胞取自新生儿脐静脉，用0.25％胰酶灌入脐静脉内，室温下消化10min，用胎牛血清中和胰酶，然后将消化液离心，分离出内皮细胞，放入80％M199培养液+20％胎牛血 激光瓣膜成形＋内皮细胞种植的离体研究2 清的培养液中，置入 37“C、5肌。恒温培养箱中培养。每日 在倒置光显微镜下观察细胞的生长情况，待内皮细胞在培养 板上铺满单层后，即进行传代。用第二代细胞进行种植。 在严格无菌条件下用Nd：叩P 激光对瓣膜进行成形，去 除瓣膜表面的钙化灶及增厚部分，用扫描电镜对成形后的瓣 膜进行观察。 将瓣膜剪成适当大小放入24 孔培养板中，将内皮细胞 种在瓣膜表面。共分4 组，每组两孔瓣膜孔，一孔对照孔， 分别于培养的2、4、6、8 天取出，用扫描电镜观察瓣膜表 面内皮细胞的生长情况。将培养6、8 天的瓣膜放在体外循 环装置中，用循环血流冲击4 小时，然后取出瓣膜，用扫描 电镜观察瓣膜表面内皮细胞的粘附情况。 结果： 扫描电镜下观察：内皮细胞种植瓣膜2天后，瓣膜表面 约 2 0刁 0％的部分被内皮细胞覆盖；4 天后达 5 0刁 0见 6、8 天可见内皮细胞基本在瓣膜表面形成单层。经血流冲击后， 仍可见 3 0叫 0％的内皮细胞粘附在瓣膜表面。 综上所述，激光瓣膜成形后，瓣膜表面种植内皮细胞以 促进瓣膜修复，是一种可行的瓣膜成形方法。