广西产圆斑蝰蛇蛇毒神经生长因子的分离纯化、鉴定及神经生物学活性

【摘要】： 神经生长因子(Nerve Growth Factor，NGF)是一类感觉和交感神经元生长必需的蛋白质，具有潜在的临床应用价值。蛇毒是NGF重要的来源之一。本文将广西产圆斑蝰蛇毒粗毒先后经CM52阳离子交换柱层析，DEAE Sephadex A-50阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤等方法分离、纯化神经生长因子(NGF)。利用PC12细胞生物活力测定为跟踪监测手段，将活性峰纯化，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦圆盘电泳(EFG)等方法，进行理化性质的鉴定。测得该蛋白质分子量为36KD，由两个亚基通过二硫键交联组成二体结构。等电点pI为6.7，能够促进PC12细胞分化为类似正常的神经细胞。 建立大鼠坐骨神经钳夹模型。将纯化的蛇毒神经生长因子溶入0.8％琼脂中，制成圆形膜片，术后植入损伤神经处，在局部释放NGF，直接作用于损伤的坐骨神经。NGF治疗组的趾间距，痛阈的恢复明显好于空白对照组，且有显著性差异。Tarlov评分也表明给药组的恢复明显好于对照组。说明局部外源性给予蛇毒神经生长因子能明显改善损伤的坐骨神经功能。