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自体骨髓间充质干细胞复合胶原膜修复兔膝关节全层软骨缺损的实验研究

王日雄  
【摘要】:目的: 研究自体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)复合胶原膜(medical collagen membrane of gtr,MCMG)对兔膝关节局部全层软骨缺损的修复作用。方法: 1 .抽取新西兰大白兔髂棘骨髓,梯度密度离心法分离结合贴壁筛选法获得MSCs,应用流式细胞术鉴定,并观测在体外培养条件下MSCs的形态、生长特点。取第三代MSCs,Hoechst-33342荧光标记后种植于胶原膜支架上,培养48小时后,移植于兔膝关节双侧股骨内髁负重区、股骨滑车软骨缺损处。2 .选用健康的新西兰大白兔27只,随机分成A , B , C 3 个处理组各9 只,A 处理组(MSCs/ MCMG) 双侧股骨内髁负重区、股骨滑车软骨缺损处植入MCMG与自体MSCs复合物;B处理组(MCMG) 单纯植入MCMG;C 处理组(对照) 不作任何植入。分别于术后4 , 8 和12周各处死3只动物,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS 11. 0 软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义。3 .荧光显微镜观察修复组织的细胞来源。结果:1 .采用梯度密度离心法分离结合贴壁筛选法可获得较高纯度和活性的MSCs,并能大量增殖;2 .MSCs复合MCMG组为透明软骨样修复,而单纯MCMG移植组和对照组为纤维性修复。对术后12周大体及各阶段组织学形态评分结果示:MSCs复合MCMG在股骨内髁与在滑车修复无明显差别( P 0. 05);MSCs/ MCMG 组明显优于MCMG植入组和对照组( P 0. 05) ; MCMG植入组优于对照组( P 0.05) 。3 .修复组织的细胞来源于移植的MSCs。结论:1.自体MSCs复合胶原膜对兔膝关节全层软骨缺损有修复作用。2 .修复组织的细胞来源于移植的MSCs。


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