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幽门螺杆菌oipA DNA疫苗的免疫保护作用研究

吴小茜  
【摘要】:【目的】探讨幽门螺杆菌(Hp)oipA DNA 疫苗在抗螺旋形与球形Hp 感染中的作用及其机制。 【方法】抽提并纯化在体外成功表达OipA 的重组质粒pcDNA3.1-oipA 及pcDNA3.1,以金粉包裹后,用基因枪接种法免疫BABL/C 小鼠,5μg/只,于第0、14 天各接种1 次。对免疫小鼠进行:1)免疫保护实验,小鼠于末次免疫后8 周,分别给予螺旋形Hp 及诱变的球形Hp 攻击,菌量为0.5×10~9/只,于第0、3、6、9 天灌胃攻击,共4 次,于末次攻击4 周后取胃组织作细菌学(组织尿素酶试验、细菌培养)及组织病理检测,分析pcDNA3.1-oipA 产生的免疫保护作用。2)小鼠免疫指标检测,分别于末次免疫后2、8、12 周采集小鼠血清,用ELISA 法检测其抗Hp OipA IgA、IgG 、IgG1 抗体,以了解所产生的体液免疫。于末次免疫后12 周,摘除部分小鼠眼球并取血,而后脱颈椎处死小鼠,取脾细胞分别作:①ELISA 检测IFN-γ、IL-2 的含量(血清及脾细胞);②流氏细胞术检测CD4~+/CD8~+T 淋巴细胞的比值,以了解其所产生的细胞免疫水平。3)尝试用更适用于人体疫苗的pVAX1 载体取代pcDNA3.1 构建oipA 重组质粒,以更具人体可行性的肌肉注射途径取代基因枪接种免疫BABL/C 小鼠,100μg/只,分别在第0、7、14 天各注射1 次。于末次免疫后8 周对免疫后小鼠给予Hp 攻击,4 周后取胃组织作细菌学与组织病理检测,评价pVAX1-oipA 产生的免疫保护作用。 【结果】1)pcDNA3.1-oipA DNA 疫苗免疫保护实验,小鼠胃粘膜细菌学检测结果显示:以螺旋形及球形Hp 攻击的免疫小鼠(实验组)快速尿素酶实验阳性率分别为20%(2/10)和10%(1/10);细菌培养阳性率分别为60%(6/10)和50%(5/10),与相应的pcDNA3.1 接种的空载组比较阳性率降低,差异均具有显著性(P0.05)。组织学检测结果显示:空载对照组小鼠胃粘膜均出现轻度或重度糜烂,而以螺旋形Hp 攻击的实验组小鼠50% (5/10)胃粘膜正常,以球形Hp 攻击的实验组小鼠60%(6/10)胃粘膜正常,与对照组比较差异有显著性(P0.05)。2)小鼠免疫指标检测结果:小鼠在免疫后8 周,产生了抗OipA 的


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