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脊髓性肌萎缩症单体型连锁分析和单细胞扩增方法的建立及应用研究

苏峻峰  
【摘要】:目的:1、优化脊髓性肌萎缩症(SMA)产前基因诊断体系。 2、建立单细胞扩增技术平台。 3、应用单细胞扩增方法对SMA进行基因诊断研究。 方法:1、应用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)技术对和运动神经元生存基因(SMN)紧密连锁的短串联重复(STR)位点进行等位频率分析。 2、联合运用PCR-限制性酶切、变性高效液相色谱(DHPLC)、STR连锁分析及基因扫描技术对SMA家系进行产前诊断。 3、应用巢式PCR、引物延伸预扩增(PEP)及荧光PCR对单个淋巴细胞进行扩增。 4、应用PCR-限制性酶切技术对正常人及SMA患者单个淋巴细胞进行SMN1缺失检检测。 结果:1、从11个与SMN基因连锁的STR位点中优选出了3个多态信息含量丰富、杂合率高的位点。 2、应用优选出的3个STR位点(D5S435、D5F149、D5S351)进行SMA家系连锁分析,并联合应用基因扫描、PCR-限制性酶切及DHPLC进行产前基因诊断,结果准确、可靠。 3、用巢式PCR、引物延伸预扩增法扩增单细胞,扩增率分别为90%和85%。 4、巢式PCR、引物延伸预扩增单细胞SMN基因7、8号外显子,PCR产物进行限制性酶切,结果和从全血中抽提DNA后PCR-限制性酶切结果一致。 结论:1、联合PCR—限制性酶切、DHPLC、STR连锁分析及基因扫描技术使SMA产前诊断结果更准确、可靠。


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