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乙型肝炎病毒DNA聚合酶末端蛋白抗α-干扰素功能区域分析

王林  
【摘要】: 乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV),可引起由无症状病毒携带、急慢性肝炎、肝硬化至肝癌的一系列病变。α-干扰素(Interferon-α, IFN-α)是目前最常用的治疗乙型肝炎的药物之一,它通过建立细胞内抗病毒状态和免疫调节作用抑制并清除病毒。但临床发现约2/3的患者表现为对IFN-α治疗无反应,即没有出现HBeAg消失和血清HBV DNA水平降低,这与HBV DNA聚合酶有关。Foster等发现,表达HBV DNA聚合酶的末端蛋白(该“末端蛋白”事实上还包括部分Spacer区,见本文第2部分)可显著抑制细胞对IFN-α反应,并认为是由TP表达阻断IFN-α通路引起,但其抗IFN-α作用的功能区域迄今尚不清楚。为此,本研究拟通过构建基因缺失突变体方式,研究并确定HBV DNA聚合酶末端蛋白抗IFN-α反应的功能区域。这一研究不仅有助于深入阐明HBV抗IFN-α机制,还可为研制新的抗HBV药物提供新思路。 本研究的第一部分旨在建立肝细胞对IFN-α反应强弱的定量判定标准。为此,将人类6-16基因(一种IFN-α特异性反应基因)启动子区克隆到氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因上游,构建IFN-α反应报告载体p6-16CAT。结果表明,转染该载体的Huh7肝细胞在IFN-α诱导后CAT表达量显著增高,并与IFN-α刺激浓度呈剂量依赖关系。 本研究的第二部构建HBV DNA聚合酶末端蛋白(包括Spacer区)基因缺失突变体重组真核表达载体,并分别与报告载体p6-16CAT共转染Huh7细胞,通过检测转染细胞中CAT表达量高低评价各缺失体抗IFN-α作用。结果表明,HBV DNA聚合酶末端蛋白本身并无抗IFN-α作用,但末端蛋白+Spacer区(部分或全部)具有明显的抗IFN-α作用。说明HBV DNA聚合酶Spacer区与HBV的抗IFN-α作用密切相关。


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