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反应性氮代谢物及其清除剂影响NK细胞抗K562细胞效应的实验研究

郑美珠  
【摘要】: [目的]:探讨反应性氮代谢物(RNM)对NK细胞抗K562细胞活性的影响及硫普罗宁和还原型谷胱苷肽逆转ROM、RNM抑制NK细胞抗K562细胞活性的免疫佐剂作用。 [方法]:1.在NK细胞、K562细胞培养体系中,加入外源性ONOO-,观察RNM和ROM产量、NK细胞活性变化;2.采用IL-2及PHA为激活剂,使RNM、ROM产量增多,观察KIR和NK细胞活性的相应变化,然后在MO+NK+K562(E/T=10/1,E/MO=10/2)细胞培养体系中加入不同浓度的硫普罗宁、还原型谷胱苷肽和二氢氯组胺,定期检测RNM、ROM产量、KIR及IL-6、TNF-β、IFN-γ的产量。 [结果]:1.在NK细胞、K562细胞培养体系中,加入外源性ONOO-后,K562细胞数量和NK细胞活性显著降低,而RNM、ROM产量增加。2.①在MO细胞培养体系中,随着MO细胞数量的增加,RNM、ROM产量有所上升;而经IL-2/PHA激活后,在MO=10组, RNM从81.8898±0.7874umom/l升至91.0308±0.8956umom/l , ROM从193.1685±9.6505U/ml升至356.4275±5.9642U/ml (P0.05)。②在NK+K562混合培养体系中,加入IL-2/PHA后,当E/T =10/1时,RNM略有增加,而ROM从58.6326±2.5141U/ml增加到141.915±8.2593U/ml(P0.05),KIR从79.98%升至93.29%(P0.05);当按E/MO=10/2、10/5、10/10三种比例加入MO细胞后,RNM、ROM产量随着MO细胞数量的增加而增加,而IL-6、TNF-β、IFN-γ的产量和KIR则相反。对K562细胞数量作偏相关分析,RNM与KIR的负相关系数大于ROM(分别为r= -0.8511,-0.7141)。③在IL-2/PHA+NK+MO+K562混合培养体系中,加入TIP、GSH、DHT后,RNM产量从73.7390±3.7908 umom/l分别降至64.5516±2.1570umom/l、63.0222±2.3090 umom/l、73.1052±1.4528 umom/l,ROM产量从321.5488±10.5030 U/ml分别降至55.1665±7.0950 U/ml、54.6136±5.9515 U/ml、108.6608±6.2110U/ml,而KIR则从65.78%分别上升至84.47%、84.77%、79.56%。随着各药物浓度的增加,RNM、ROM产量逐渐减少,而IL-6、TNF-β、IFN-γ产量和KIR则逐渐升高,KIR与RNM、ROM产量呈明显负相关(P0.01)。在清除RNM、ROM,提高NK细胞抗K562细胞活性方面,硫普罗宁与还原型谷胱苷肽作用相似(P0.05),但均优于二氢氯组胺(P0.05)。 [结论]:1.外源性ONOO-对NK、K562细胞有毒性,并可转化及诱导细胞产生ROM。2.MO细胞是ROM、RNM的最主要来源,而K562细胞、NK细胞也产生少量的ROM、RNM.。3.RNM、ROM均可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降。4.硫普罗宁、还原型谷胱苷肽均可通过清除ROM、RNM保护NK细胞,提高NK细胞抗瘤活性,且对ROM、RNM的清除表现出一定的量效关系,但二氢氯组胺不能清除RNM。5.在清除ROM、RNM及提高NK细胞对K562细胞的抑制率方面,硫普罗宁、还原型谷胱苷肽效应相当,但均优于二氢氯组胺,且毒副作用较低,有望成为新的免疫佐剂用于白血病的过继性免疫治疗中。


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