乙型肝炎病毒包膜蛋白与跳跃断裂易位蛋白相互作用的验证

【摘要】： 目的:本研究采用哺乳动物细胞双杂交、免疫共沉淀以及GST pull-down等方法进一步确认HBV包膜蛋白(HBsAg)与跳跃断裂易位(Jumping Translocation Breakpoint, JTB)蛋白之间的相互作用。 方法:采用Stratagene公司生产的哺乳动物细胞双杂交系统进行验证。将pCMV-BD-JTB、pCMV-AD-全S质粒及报告质粒pFR-Luc共转染入293FT细胞以确证HBsAg与JTB蛋白的相互作用。收集293FT细胞表达的BD-JTB蛋白及AD-全S蛋白进行双向免疫共沉淀实验,并以JTB-GST pull-down进一步确认JTB蛋白与主S蛋白的相互作用。 结果:哺乳动物细胞双杂交提示HBsAg与JTB蛋白共染组激发的荧光素酶表达高于阳性对照组,提示两者存在相互作用;双向免疫共沉淀以及GST pull-down等方法的验证结果均提示HBsAg与JTB蛋白存在相互作用,并且两者的结合位点可能位于主S结合域。 结论:HBsAg与JTB蛋白存在相互作用,结合位点位于主S结合域。