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白念珠菌CHK突变株致病性研究

陈美静  
【摘要】: 目的 通过比较白念珠菌CHK突变株CHK26(CHK Ser/Thr MAPK和GAF结构域缺陷株)、CHK21(CHK等位基因缺失株)和标准株CAF-2对小鼠的致病性,从而了解CHK及其结构域在白念珠菌致病性中的作用。 方法 1.系统性白念珠菌感染小鼠模型的建立:清洁级健康昆明小鼠18只随机分成A、B、C三组,每组6只分别通过小鼠尾静脉注射白念珠菌CAF-2、CHK26和CHK21悬菌液0.5ml(1×10~6CFU)。取出小鼠肾脏做组织病理学检查和肾组织真菌培养。 2.小鼠死亡率及生存保护时间实验:同上方法构建小鼠模型63只,每组21只,每天两次观察各组小鼠的发病和死亡情况。 3.肾组织病理和电镜检测:构建小鼠模型12只,每组4只。第3天和第5天取小鼠模型的一个肾脏,组织病理切片、PAS染色,另一个肾脏制作电镜标本,透射电镜观察。 4.脾肾组织菌落形成单位(cfu):建立小鼠模型45只,每组15只。第1天、第3天和第5天取出5只小鼠双侧肾脏和脾脏制成组织匀浆,培养后计数菌落数。比较各组小鼠脾肾组织菌落形成单位计数的差异。 5.白念珠菌标准株、CHK突变株CHK26和CHK21制备透射电镜和扫描电镜标本,电镜下观察超微结构。 结果 1.成功建立系统性白念珠菌感染小鼠模型:三组小鼠肾脏组织病理切片PAS染色均可见明显的菌丝及孢子,肾组织培养见酵母样菌落生长。 2.死亡率及生存保护实验结果:标准株、CHK26和CHK21感染小鼠观察期间死亡率分别为100%、23.8%和0; CHK21、CHK26感染小鼠生存时间明显比标准株小鼠长,有统计学意义。 3.肾脏组织病理学和电镜检测结果:肾组织病理学检测:标准株、CHK26和CHK21感染小鼠的肾组织病理切片PAS染色均可见紫红色菌丝及孢子。透射电镜下观察见:三株白念珠菌感染肾组织上皮细胞内均可见白念珠菌孢子。标准株感染小鼠肾组织超微结构明显改变,可见小管上皮细胞表面微绒毛脱落,甚至出现灶状坏死;上皮细胞线粒体肿胀;肾间质中性粒细胞浸润等超微结构变化。而CHK26感染小鼠肾组织病变则较轻,个别肾小管上皮细胞水肿;溶酶体增多;肾间质中性粒细胞浸润。CHK21感染小鼠肾组织结构大致正常;仅见个别上皮细胞肿胀;少量中性粒细胞浸润。 4.脾肾组织菌落形成单位(cfu)结果:白念珠菌感染小鼠脾肾组织中菌落计数结果如表3所示:CHK21在脾肾组织中清除最慢,CAF-2清除最快,CHK26介于标准株和CHK21之间。 5.白念珠菌透射电镜见CHK26细胞壁厚薄不一,电子致密外层和透明内层明显比CAF-2少,甚至部分细胞壁消失;细胞膜基本完整。CHK21细胞壁较完整,厚薄不一,厚度介于两者之间。扫描电镜见三株白念珠菌呈圆形或椭圆形,表面光滑;标准株和CHK26菌株在细胞长轴两端可见出芽;而CHK21菌株细胞表面芽痕随意分布。 结论 1. CHK在白念珠菌毒力中扮演重要角色, CHK21在小鼠动物模型中表现为无毒性,CHK26则表现为毒力减低。 2.白念珠菌感染小鼠模型肾组织的病变部位主要位于肾小管。小鼠感染白念珠菌后,肾组织主要以肾小管上皮细胞吞噬念珠菌、线粒体肿胀、肾间质中性粒细胞浸润等超微结构改变为主。 3. CHK影响白念珠菌细胞壁的构建,可能也是毒力降低主要原因。 4. Ser/Thr MAPK及GAF结构域在白念珠菌毒力和细胞壁构建中起着重要作用。 5.细胞壁结构的改变,可能影响到念珠菌的出芽方式。


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