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运用SELDI-TOF MS筛选肾移植急性排斥反应特异性标志物的初步研究

陈蓉艳  
【摘要】: 目的寻找肾移植急性排斥反应患者血清中所特有的蛋白质标志物,为临床肾移植急性排斥反应非侵入性的早期诊断、预警和特异性标志物的筛选提供灵敏的实验室指标。 方法应用美国Ciphergen PBSⅡ表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(surface-enhanced laser desorption/ionizationtime of flight massspectrometry,SELDI-TOF-MS)蛋白组学研究平台,对肾移植患者术前、术后的血清进行检测,其中5例病理诊断为急性排斥组(血清标本共30份),25例为术后稳定组(血清标本共50份),15例尿毒症疾病对照组(血清标本共30份)。采用BMW(Biomarker Wizard)软件和BPSS5.0(Biomarker patterns systems)软件分析差异蛋白峰,建立诊断模型,以此模型进行双盲验证,并对急性排斥组进行单个患者的纵向分析。 结果M/Z位于1000—100000范围内,肾移植急性排斥反应组和术后稳定组血清中共检测到188个差异蛋白质峰(p<0.05),其中有51个显著差异蛋白P<0.001,这些差异显著的蛋白峰聚集在3888~5905、7344~9501以及11342~11940、12149~14687范围内。经BMW软件分析发现,在这些蛋白质峰中有24个蛋白峰出现从疾病对照组到急性排斥组、稳定存活组依次递增或递减的趋势,其中有14个蛋白峰依次递增,10个依次递减。由BPS软件分析筛选出的M_8136和M5872这2个蛋白峰组成的蛋白质质谱分类决策树,能判别肾移植急性排斥组、稳定存活组以及疾病对照组,敏感度、特异度高,并能用于判断肾移植急性排斥组的排斥期和缓解期。 结论SELDI-TOF MS技术平台可用于筛选肾移植患者血清中的特异性标志物。所得到的差异性蛋白峰M-8136和M-5872的诊断模型敏感度和特异度高,可用于诊断肾移植急性排斥反应,并且对其早期预警以及治疗有一定临床意义。所获得的差异性蛋白峰有利于肾移植急性排斥反应发病机理的进一步研究。


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