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shRNA抑制FAK表达治疗大肠癌转移的体外实验研究

毛贺辉  
【摘要】: 背景与目的 大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升。目前大肠癌治疗手段仍以手术为主,同时辅以放、化疗的综合治疗。对晚期及转移者,临床治疗效果差[1-2]。大肠癌病人的死亡主要是肿瘤转移所致。肿瘤的转移是个复杂的过程,基本步骤包括肿瘤细胞侵袭、突破细胞基质,进入血液,经血流到达远处器官,突破血管进入靶器官定居、增殖。 研究表明:粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)作为胞内重要的信号分子,介导细胞内信号网络系统的交联,在细胞的移动和侵袭中起关键的作用。FAK在原发癌及肝转移癌中均较正常大肠粘膜表达增高。因此,若人为干预FAK的表达,有望为大肠癌的治疗提供一条新的途径。 RNA interference(RNAi)具有很强的抑制目的基因作用。较反义寡核苷酸抑制目的基因的效果更强,RNAi被认为是继PCR后又一划时代的基因工程方法。 研究方法 1.构建FAK RNAi慢病毒载体。 2.对体外培养结肠癌SW620细胞进行转染,建立稳定转染细胞株。通过报告基因GFP检测细胞转染状态,运用RT-PCR、Western blot等方法鉴定FAK被抑制的情况。MTT法检测SW620细胞干扰FAK表达前后增殖活性的变化。 3.制备Transwell小室,检测沉默FAK基因表达对SW620细胞侵袭能力的影响。 结果 1.成功构建了靶向FAK的RNAi慢病毒载体。 2.RT-PCR及Western blot方法检测发现: FAK干扰组较未处理组及阴性质粒对照组FAK的表达明显降低;MTT实验观察到与未处理组及阴性对照组细胞相比,干扰组细胞生长抑制(P0.05)。 3.侵袭实验:与未处理组及阴性对照组细胞相比,干扰组细胞侵袭能力明显下降(P0.05),正常组及阴性对照组细胞之间无明显差别(P0.05)。 结论 1.成功构建FAK的RNAi慢病毒载体。 2.FAK shRNA重组慢病毒载体有效抑制转染大肠癌SW620细胞增殖活性。 3.FAK沉默明显抑制大肠癌细胞SW620的侵袭转移能力。


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