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15-LOX-1基因抑制胃癌细胞AGS增殖诱导凋亡的作用机制研究

陈冬梅  
【摘要】: 目的:脂氧合酶对肿瘤的作用已成为肿瘤研究领域的热点之一,本研究旨在研究15-LOX-1基因抑制人胃癌细胞AGS增殖,诱导其凋亡的作用机制。 方法:通过脂质体介导瞬时转染15-LOX-1基因于胃癌细胞AGS中,以转染空质粒PCDNA3.1的AGS细胞及未转染质粒的AGS细胞为对照,RT-PCR法检测15-LOX-1和PPARγmRNA表达;Western blot法检测15-LOX-1、PPARγ、P27/Skp2、Bax/Bcl-2蛋白表达;四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测15-LOX-1和GW9662对胃癌细胞AGS增殖水平的影响。 结果:(1)胃癌细胞AGS中未检测到15-LOX-1mRNA和蛋白的表达,转染后的AGS表达有15-LOX-1的mRNA及蛋白。(2)转染15-LOX-1后细胞周期抑制因子P27表达较未转染和转染空载质粒组显著上调,而S相激酶相关蛋白2(Skp2)表达下降(P0.05)。(3)转染48小时后,AGS/15-LOX-1组细胞存活率为58.5%,显著低于AGS及AGS/PCDNA3.1组(P0.05)。AGS/15-LOX-1组细胞加入10uM GW9662作用48小时后,细胞存活率为76.2%,较GW9662作用前显著升高(P0.05)。(4) AGS、AGS/15-LOX-1、AGS/PCDNA3.1组均能检测到PPARγmRNA和蛋白的表达,且AGS/15-LOX-1组PPARγ表达量较其他两组显著增多(P0.05),10uM GW9662能够下调AGS/15-LOX-1组PPARγ表达。(5) AGS/15-LOX-1组Bax蛋白的表达较AGS和AGS/PCDNA3.1组上调,而Bcl-2蛋白的表达量下降(P0.05),加入GW9662作用48h后,AGS/15-LOX-1组Bax/Bcl-2蛋白的表达量与AGS和AGS/PCDNA3.1组无显著差别(P0.05)。 结论:15-LOX-1可能经由PPARγ途径,通过调节细胞周期蛋白Skp2和P27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,并通过调节下游凋亡相关基因Bax/Bcl-2的表达,抑制细胞增殖,促进其凋亡。


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