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慢性全脑低灌注大鼠侧脑室旁白质改变及MMP-2,3和7的表达

詹增土  
【摘要】: 【背景】: 近年来随着影像学技术的发展,脑白质损伤(White matter lesions,WML)在临床上越来越多地被检出,目前大量的研究表明脑白质损伤与认知功能障碍、痴呆有着密切联系【1、2】。随着全球人口进入老龄化的社会,认知功能障碍、痴呆给家庭、经济和社会带来了许多严重问题。因此研究脑白质损伤的机制,为寻求有效的保护和治疗措施提供新的思路,显得十分有意义。目前的研究表明,缺血是造成脑白质损伤的重要原因,但具体的机制仍未十分明确。 【目的】: 1、采用双侧颈总动脉分期永久结扎法建立大鼠慢性全脑低灌注模型,观察低灌注下大鼠侧脑室旁白质的改变,探讨该法是否适用于慢性缺血性脑白质损伤的实验研究。 2、检测大鼠侧脑室旁白质基质金属蛋白酶2,3和7(Matrix metalloproteinase-2, 3 and 7, MMP-2,3 and 7)的表达变化并探讨其意义。 【方法】: 1、清洁级wistar雄性大鼠60只,随机分为假手术组1组和模型组3组(20天组、40天组、60天组),每组各15只,模型组行双侧颈总动脉分期永久结扎术制备慢性全脑低灌注模型。 2、透射电镜观察侧脑室旁白质超微结构变化,神经髓鞘固蓝染色法(Luxol fast blue staining, LFB staining)对脑组织进行髓鞘染色,观察白质的病理改变。胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein, GFAP)免疫组化染色观察星形胶质细胞的变化。免疫印迹法检测侧脑室旁白质髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein, MBP)的含量变化。 3、免疫组化染色法和免疫印迹法分别定位和半定量检测大鼠侧脑室旁白质MMP-2,3和7的表达变化。 4、统计学处理。 【结果】: 1、电镜观察到模型20天组大鼠胼胝体和内囊有髓纤维髓鞘发生变形、板层结构疏松、崩溃等脱髓鞘改变,血管旁明显水肿现象,而假手术组未见明显变化。神经髓鞘固蓝染色可见各模型组胼胝体和内囊出现不同程度脱髓鞘、空泡形成等白质损伤改变,而假手术组未见明显变化。 2、GFAP免疫组化染色:各模型组胼胝体和内囊见星形胶质细胞胞体肥大、突触增粗、数量增多。经半定量分析,各模型组GFAP表达随低灌注时间延长逐渐增多,较假手术组差异均有明显统计学意义。免疫印迹法检测MBP水平含量:随低灌注时间延长,各模型组胼胝体和内囊MBP水平逐渐下降,较假手术组差异均有明显统计学意义。 3、各模型组胼胝体和内囊MMP-2,3和7表达均较假手术组增多,MMP-2,3和7表达与侧脑室旁白质损伤呈明显正相关。 【结论】: 1、分期永久结扎wistar大鼠双侧颈总动脉制作的慢性全脑低灌注模型可造成侧脑室旁白质进行性缺血损伤,是一种可用于慢性缺血性脑白质损伤研究可行、经济的模型。 2、大鼠慢性全脑低灌注后侧脑室旁白质MMP-2,3和7表达上调,可能参与白质损伤的进展。


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