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骨髓间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮鼠机制及疗效评价

黄金棋  
【摘要】: 目的:研究间充质干细胞(MSC)的输注是否可以减轻系统性红斑狼疮(SLE)小鼠的自身免疫反应,改善其免疫损伤,并探讨MSC治疗SLE机制。 方法:1)分离大鼠骨髓MSC:分离雄性SD大鼠(80g)股骨、胫骨,采用全骨髓培养法分离、扩增、传代、冻存、复苏MSC,并描绘MSC生长曲线。2)动物实验分组:将雌性MRL/mp(fas)lpr小鼠随机分为2组,每组5只,试验组:在14周龄时尾静脉输注MSC(0.3×106/0.15ml.只);对照组:以生理盐水代替MSC作尾静脉输注。3)实验持续8周,进行下列指标观察:①每天观察小鼠一般情况:进食、精神、毛发、体重、存活时间直至处死。②每3天收集小鼠尿液,行bradrord法尿蛋白浓度测定。③每周剪尾采血50ul,分离血清,放射免疫法测血清抗ds-DNA抗体浓度。④小鼠22周龄时切取肾脏作病理切片检查,观察狼疮性肾炎肾症病理改变,同时作免疫复合物免疫组织化学检查。⑤流式细胞术测外周血、脾脏、胸腺CD4﹢CD25﹢T细胞水平。 结果:1)采用全骨髓培养法,7-10天后细胞可铺满培养瓶底85-95%,传至第2、3代后收集细胞,生长曲线示原代至3代的MSC生长状态较好。2)尾静脉输注后,小鼠局部、整体无不良反应。3)在实验观察的8周时间内:①2组小鼠均存活8周直至处死,进食、精神状态、活动度、体重、毛发大致相同。②实验前两组尿蛋白浓度无统计学差异(P0.05);MSC输注组,尿蛋白浓度显著低于对照组(P0.05);③MSC输注组,血清抗ds-DNA抗体浓度显著低于对照组(P0.05)。④肾脏病理HE染色观察:MSC输注组小鼠间质性肾炎病理改变较对照组小鼠减轻。肾脏病理免疫组化染色观察:MSC输注组小鼠的肾小球系膜区免疫复合物沉积量减少,范围缩小呈点状分布;对照组小鼠的肾小球系膜区免疫复合物沉积量较多,范围较大呈片状分布,两组有显著性差异(P0.05)。⑤试验组外周血、胸腺中CD4﹢CD25﹢T细胞水平显著高于对照组(P0.05);试验组脾脏CD4﹢CD25﹢T细胞略高于对照组,无显著差别(P0.05)。 结论:MSC易于在体外分离扩增,输注无明显不良反应。MSC输注可以改善MRL/mp(fas)lpr小鼠的自身免疫反应损伤的状况,其机制可能通过上调雌性MRL/mp(fas)lpr小鼠CD4﹢CD25﹢T细胞水平,减少自身抗ds-DNA抗体的产生,改善肾脏免疫病理损伤。


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