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阿托伐他汀对肾大部分切除大鼠内皮祖细胞动员及其对残肾的修复作用

张振花  
【摘要】: 目的:探讨阿托伐他汀是否动员5/6肾切除大鼠内皮祖细胞到残余肾脏参与其修复及其可能机制。 方法:将32只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(control)、肾大部分切除组(model)、肾大部切除加小剂量阿托伐他汀(8mg·kg-1·d-1)治疗组(LD)、肾大部切除加大剂量阿托伐他(16mg·kg-1·d-1)治疗组(HD)。阿托伐他汀治疗8周后,采用密度梯度离心法从外周血中获得单核细胞,将其接种在人纤连蛋白包被的培养板上,M199培养七天的贴壁细胞供试验用,观察细胞形态并计数,通过流式检测细胞表面标记CD34,CD133和KDR(VEGFR-2)以及免疫荧光检测细胞内吞UEA-1和结合acLDL来鉴定EPCs,并检测EPCs增值、粘的能力。用免疫组化检测肾组织CD34+细胞数目、肾小球CAP内皮细胞密度,用RT-PCR检测肾组织eNOS、ET1、TGF-β、COL IV mRNA的表达,用HE、PAS、天狼猩红胶原染色检测残肾组织病理改变,并检测Scr、BUN、尿蛋白、胆固醇(TCHO)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酸激酶(CK)。 结果:用激光共聚焦显微镜显示分离、纯化的细胞DiI-acLDL和FITC-UEA-1呈免疫双荧光阳性;流式细胞仪显示体外分离培养的原代9天EPCs表面抗原表达分别是CD34阳性细胞表达率79.42%,CD133阳性细胞表达率4.14%,VEGFR-2阳性细胞表达率55.7%。应用阿托伐他汀治疗能显著增加残肾模型大鼠EPCs增值、粘附及能力(P0.05),并增加外周血EPCs数量(P0.05),显著增加肾组织CD34+细胞的数目以及肾小球毛细血管内皮细胞密度(P0.05),上调肾组织VEGF、eNOS mRNA的表达(P0.05),下调肾组织ET1、TGF-β、COL IV mRNA的表达(P0.05),从而改善肾小球毛细血管内皮功能,减轻炎症细胞侵润、系膜增生、系膜基质沉积,减轻肾小球硬化肾间质纤维化(P0.05)。尿蛋白、血肌酐及尿素氮水平明显降低(P0.05),TCHO、TG、LDL、AST、ALT和CK在各组间无明显差异(P﹥0.05)。 结论:阿托伐他汀可呈剂量依赖性地改善5/6肾切除大鼠肾功能,降低蛋白尿,减轻残余肾脏的病理改变,以上作用不依赖于血脂水平;阿托伐他汀呈剂量依赖性增加外周血中EPCs数量,改善EPCs的增殖、粘附能力;阿托伐他汀对残余肾脏的修复作用可能与其动员内皮祖细胞参与损伤肾脏的修复有关。


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