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片仔癀对裸鼠原位移植骨肉瘤的作用及机制研究

杨德建  
【摘要】:目的:观察片仔癀对裸鼠原位移植骨肉瘤生长及肺脏转移的抑制效应,探讨其抑制骨肉瘤生长及肺转移的机制,为临床应用片仔癀治疗骨肉瘤提供实验依据。 方法:1.建立和鉴定自发肺转移的裸鼠骨肉瘤模型:BALB/c-nu/nu裸鼠30只,4周龄,雌性,体重18±2g,随机分为生理盐水组(n=5)和模型组(n=25),麻醉后模型组裸鼠右侧胫骨骨髓腔内注射UMR106-01骨肉瘤细胞悬液100ul(5×106个/m1),生理盐水组裸鼠相同部位注射等剂量生理盐水作为对照组。原位移植后第1、2、3、4、5周末分别随机处死模型组裸鼠5只;观察原位肿瘤生长侵袭、肺转移情况,并取原位瘤块、肺脏组织做病理学检测。2. BALB/c-nu/nu裸鼠32,4周龄,雌性,体重18±2g,采用第一步裸鼠骨肉瘤模型建立的方法造模,裸鼠原位移植1周后随机分为:生理盐水组(n=8)、甲氨蝶呤组(n=8)、片仔癀组(n=8)、联合治疗组(n=8);观察各组裸鼠一般状况;原位移植后每隔1周测量一次原位肿瘤体积,绘制肿瘤的生长曲线,并计算抑瘤率;给药结束次日剖取4组荷瘤鼠肺脏和原位瘤块,在放大镜下计数肺脏表面转移灶数,并行HE染色病理学观察,通过免疫组化法检测4荷瘤鼠原位瘤块中Survivin、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白的表达情况。 结果: 1.建立和鉴定自发肺转移的裸鼠骨肉瘤模型:通过原位移植法建立的自发肺转移裸鼠骨肉瘤模型,原位移植1周移植处见肿瘤形成,原位移植5周原位成瘤率为100%及肺转移率为100%,原位瘤块及肺组织病理学观察可见典型的骨肉瘤病理学特征。 2.各组裸鼠一般情况:生理盐水组(A组)裸鼠原位瘤块体积增长显著,裸鼠明显跛行,精神萎靡;甲氨蝶呤组(B组)裸鼠原位瘤块体积增长较慢,裸鼠轻微跛行,精神状态欠佳:片仔癀组(C组)裸鼠原位瘤块体积增长有所减慢,裸鼠跛行,精神状态尚可;联合治疗组(D组)裸鼠原位瘤块体积增长明显减慢,裸鼠轻微跛行,精神状态较好。原位移植5周后生理盐水组、甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组裸鼠原位瘤块体积分别是6.3±0.37cm3、4.74±0.35cm3、5.08±0.55cm3、3.59±0.55cm3,各实验组与生理盐水组相比P<0.05,甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组荷瘤裸鼠体重两两比较P<0.05。甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组裸鼠体重分别是24.00±0.33g、25.50±0.33g、27.20±0.21g,与生理盐水组相比P<0.05;甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组荷瘤裸鼠体重两两比较P<0.05。 3.抑瘤率情况:甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组抑瘤率分别是24.8%、19.7%、43%,与生理盐水组相比P<0.05;甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组抑瘤率两两比较P<0.05。 4.肺脏转移情况:甲氨蝶呤组、片仔癀组、联合治疗组肺表面转移灶数分别是50±1.4个、54±1.6个、44±1.6个,与生理盐水组相比P<0.05;甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组肺脏表面转移灶数两两比较P<0.05。 5.各组原位肿瘤Survivin、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白的表达情况:甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组Survivin、VEGF、MMP-9蛋白免疫组化平均灰度值比生理盐水组低(P<0.05);甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组Survivin、VEGF、MMP-9蛋白免疫组化平均灰度值两两比较P<0.05。甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组TIMP-1蛋白免疫组化平均灰度值比生理盐水组高(P<0.05);甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组TIMP-1蛋白免疫组化平均灰度值两两比较P<0.05。 结论: 1.原位移植法建立裸鼠骨肉瘤模型符合临床骨肉瘤特征,造模方法简便,可操作性强,重复性好,成瘤率及肺转移率高,是本实验研究的理想模型。 2.片仔癀与甲氨蝶呤联合应用对原位骨肉瘤有抑制作用。 3.片仔癀对骨肉瘤的肺转移有抑制作用,与甲氨蝶呤联合应用对骨肉瘤肺转移的抑制有协同作用。 4.片仔癀可能是通过抑制Survivin、VEGF、MMP-9蛋白表达,增强TIMP-1蛋白表达,发挥对骨肉瘤生长及肺转移的抑制效应。


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