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基于PI3K/Akt通路研究大黄素对3T3-L1脂肪细胞炎症反应和葡萄糖摄取的影响

向青  
【摘要】:目的:通过现代分子生物学方法,观察大黄素对3T3-L1脂肪细胞炎症反应和葡萄糖摄取的影响,并基于PI3K/Akt通路探讨其可能的作用机制。 方法:(1)分化成熟的3T3-L1脂肪细胞经脂多糖刺激后,加入不同浓度大黄素干预24h, ELISA法检测细胞培养上清液中IL-6含量;Western blot检测细胞浆和细胞核NF-KBp50、NF-KB p65蛋白表达水平;检测PTEN、PKB、p-PKB蛋白表达水平。 (2)分化成熟的3T3-L1脂肪细胞经脂多糖刺激后,加入不同浓度大黄素干预24h,进行葡萄糖摄取实验;Real-Time PCR检测GluT-4基因表达水平;Western blot检测GluT-4蛋白表达水平。 (3)用PI3K/Akt通路抑制剂渥曼青霉素抑制PI3K活性后,研究大黄素对3T3-L1脂肪细胞PKB、p-PKB蛋白表达水平,炎症反应和葡萄糖摄取的影响。 结果:(1)大黄素能明显降低经LPS刺激后的3T3-L1脂肪细胞培养上清液中IL-6含量(1μMp0.05,10μM、50μMp0.01);明显降低细胞核内NF-κBp65、NF-κBp50蛋白表达水平。明显降低PTEN蛋白表达水平(p0.01);明显增加p-PKB/PKB蛋白表达水平比值(10μm、50μMp0.01)。 (2)大黄素能明显提高3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取量(1μM、10μM p0.05,50μMp0.01);明显增加3T3-L1脂肪细胞GluT-4基因和蛋白表达水平(基因表达水平:1μM、5μMp0.05,10μMp0.01;蛋白表达水平:lμMp0.05,10μM、50μM p0.01)。 (3)渥曼青霉素抑制PI3K活性后,p-PKB/PKB蛋白表达量比值明显降低(p0.05),而大黄素能逆转渥曼青霉素对p-PKB/PKB的抑制作用;渥曼青霉素能明显刺激IL-6的释放(p0.05),而大黄素能逆转渥曼青霉素刺激IL-6的释放;渥曼青霉素明显抑制3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取量(p0.05),而大黄素能逆转渥曼青霉素对葡萄糖摄取量的抑制作用。 结论:大黄素通过降低PTEN蛋白表达水平,激活PI3K/Akt信号途径,降低细胞核内NF-κBp65、NF-κBp50蛋白表达水平,抑制IL-6的释放,从而发挥抗炎作用;大黄素激活PI3K/Akt信号途径能,提高3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取能力,可能是通过上调3T3-L1脂肪细胞GluT-4基因和蛋白表达水平。 实验结果提示,大黄素可能通过抑制3T3-L1脂肪细胞炎症反应和提高脂肪细胞葡萄糖摄取能力,从而增加胰岛素敏感性。


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