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基于PI3K/AKT信号通路研究清达颗粒调控血管张力控制高血压的作用机制

黄月  
【摘要】:目的:探讨清眩降压汤优化后的清达颗粒对血管张力的影响和对离子通道及PI3K/AKT信号通路的调控作用,以期为清达颗粒临床抗高血压治疗提供实验依据。方法:1.分离Wistar Kyoto(WKY)大鼠胸主动脉血管环,通过体外血管张力实验,比较清眩降压汤和清达颗粒对高钾(KCl)和去甲肾上腺素(NE)预收缩后血管环舒张作用的影响。2.WKY组(n=6)、自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat,SHR)组(n=6)和SHR+清达颗粒组(n=6)大鼠分别经生理盐水或清达颗粒灌胃8周后,采用无创血压监测方法通过大鼠尾动脉检测各组大鼠血压;并分离胸主动脉血管环,通过血管张力实验检测各组大鼠胸主动脉血管弹性。3.血管张力实验检测清达颗粒对高钾(KCl)、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管收缩的影响。通过去内皮的方法检测清达颗粒舒张血管与血管内皮细胞的关系;分别采用钾离子通道阻断剂和钙离子通道阻断剂预孵育血管环,检测清达颗粒舒张血管与钾、钙离子通道的关系。4.在无钙Kreb’s液中,观察清达颗粒干预后对KCl或NE刺激后血管环对不同浓度CaCl_2诱导收缩的影响。培养血管平滑肌细胞(Rat embryonic thoracic aorta smooth muscle cell,A7r5)并给予清达颗粒干预24h后,分别加入KCl或NE刺激,通过激光共聚焦实验检测清达颗粒干预对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。5.采用Western-blot实验检测清达颗粒干预后对血管中PI3K、AKT以及p-AKT表达的影响。结果:1.清达颗粒和清眩降压汤对KCl和NE预收缩后的血管环均具有显著的舒张作用。2.清达颗粒具有抑制SHR大鼠收缩压、舒张压以及平均动脉压升高的作用,并对血管环弹性有明显的保护作用。3.清达颗粒干预显著促进KCl、NE和AngⅡ预收缩后的血管环舒张,且不依赖于血管内皮和钾离子通道依赖作用。4.清达颗粒干预显著抑制KCl和NE刺激后电压依赖型和受体操纵型钙离子通道的开放及抑制血管平滑肌细胞内钙离子浓度的升高。5.清达颗粒干预显著下调PI3K/AKT关键因子PI3K表达和p-AKT/AKT比值。结论:清眩降压汤和清达颗粒均对血管具有舒张作用;且清达颗粒可以显著抑制SHR大鼠血压的升高,对血管弹性具有保护作用;通过抑制钙离子通道的开放从而抑制细胞外钙内流和内钙释放来促进血管舒张及抑制PI3K/AKT信号通路可能是其发挥抗高血压和促进血管舒张的重要机制。


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