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产生物碱和石杉碱甲石杉科植物内生真菌的研究

苏经迁  
【摘要】:从3种石杉科植物华南马尾杉、有柄马尾杉及蛇足石杉的不同组织器官中分离获得127株内生真菌。运用已构建的菌种发酵及生物碱筛选条件,从127株内生真菌中筛选出28株可能产生物碱的内生真菌。以28株可能产生物碱的内生真菌为出发菌株,通过乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模型,从中筛选出10株产乙酰胆碱酯酶抑制剂的内生真菌。运用溴甲酚绿酸性染料法分析表明,不同菌株发酵液中生物碱的含量不同,其中以菌株YS-02的吸光值最大,YS-13次之。在此基础上,结合HPLC法及LC-MS法,从中筛选出2株产生与宿主相同的活性成分石杉碱甲的内生真菌YS-02和YS-13,其产量分别为26.4μg/L和21.0μg/L,经形态学和rDNA-ITS序列分析,初步鉴定YS-02菌为炭角菌目(Xylariales)内生真菌,YS-13为纤姿拟青霉(Paecilonmyces tennis),这两株菌发酵产石杉碱甲尚属首次报道。通过自动生物发酵罐培养技术完成了纤姿拟青霉YS-13的扩大培养的初步研究,发酵产物分析表明纤姿拟青霉YS-13经发酵罐扩大培养可产石杉碱甲,其产量为20.0μg/L。并获得了纤姿拟青霉YS-13发酵生长过程曲线的相关参数。


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