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利用Cre/loxp系统定点删除转基因水稻胚乳中外源基因的初步研究

邱淑萍  
【摘要】: 水稻作为主要的粮食之一,其转基因食品安全性一直是人们比较关注的问题,水稻食用部位精米即胚乳,如果能在胚乳中定位删除外源基因,那么就可彻底解决转基因水稻的食品安全性的问题。本实验目的在于利用Cre/loxp定点删除系统,在转基因水稻胚乳中定位删除外源基因,构建一个高效的转基因水稻胚乳外源基因删除系统。为实现这一目的,以水稻胚乳特异性表达启动子Gt1为重组酶Cre的表达调控因子,以报告基因gus的表达设计了两条路线来验证此研究方法的可行性。路线一为外源基因在转基因水稻的根、茎、叶片中未被删除时,这些组织不表达gus基因,而在胚乳中外源基因被删除时表达gus基因,本研究构建了相应的载体pCALHGt1CGUS,通过根农杆菌转化获得了202个克隆的转基因水稻植株,存活146个克隆,分子检测表明大部分克隆中外源基因已整合入水稻基因组,gus基因表达的组织化学检测根、茎、叶、胚、胚乳都没有染上颜色,RT—PCR分子检测正在进行。路线二,在根、茎、叶等组织中外源基因不被删除时表达gus基因,在胚乳中删除外源基因后不表达gus基因,正在构建相应载体pCLHGt1CreAGUS。


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