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靶向卵巢癌的纳米脂质微泡造影剂的制备及体外寻靶研究

张劲宜  
【摘要】:目的: 制备一种靶向卵巢癌的新型纳米脂质微泡造影剂,鉴定理化特性及其对卵巢癌细胞的靶向性,为实现肿瘤血管外显影研究提供了一个前期基础。 方法: 1.将一定比例的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、生物素化二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Biotin)及甘油、PBS等混合均匀,采用冷冻干燥法、机械振荡法制备非靶向脂质微泡造影剂。 2.光镜下观察微泡形态分散度、均一性,Zeta检测仪检测粒径大小范围。 3.将一定比例的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、生物素化二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Biotin)及甘油、PBS等混合均匀,采用冷冻干燥法、机械振荡法、生物素-亲和素-生物素桥连法,制备非靶向纳米脂质微泡造影剂,将生物素化的促黄体生成素释放激素(luteinzing hormone-releasing hormone, LHRH)抗体与非靶向纳米脂质微泡造影剂连接,制备出卵巢癌靶向的纳米脂质微泡造影剂。 4.光镜下观察微泡形态分散度、均一性及浓度以及室温下保存时间,Zeta检测仪检测粒径大小范围、表面电位。 5.流式细胞术分别检测非靶向纳米脂质微泡造影剂、靶向纳米脂质微泡造影剂与二抗结合率。 6.光镜下观察靶向纳米脂质微泡造影剂与人卵巢癌OVCAR-3细胞结合情况。 7.预先用生物素化LHRH抗体与人卵巢癌OVCAR-3细胞饱和结合,再次观察靶向纳米脂质微泡造影剂与人卵巢癌OVCAR-3细胞结合情况。 结果: 1.非靶向脂质微泡造影剂是一种乳白色混悬液,400倍光镜观察及Zeta检测仪检测机械振荡60s、90s、120s,微泡分布均匀,无团聚,单个微泡的外观圆整,粒径范围粒径范围分别为329~1008nm,295~468nm,369~618nm,157~268nm,400倍光镜及观察Zeta检测仪检测机械振荡150s,微泡分布不均匀,无团聚,单个微泡的外观圆整,粒径范围60~896nm。 2.非靶向纳米级脂质微泡造影剂和靶向纳米脂质微泡造影剂微泡成功制备,两种微泡的外观圆整,分布均匀。Zeta检测仪检测粒径范围分别为295~468nm和369~618nm,集中于360nm与508nm,两者粒径大小比较有统计学差异(P<0.05 3.光镜下观察,微泡形状分散均匀和室温保存时间长。两种微泡电位均为-14.6mV。室温下保存7d时,靶向纳米脂质微泡造影剂理化特性与刚制备时无统计学差异(P>0.05)。 4.二抗与非靶向纳米脂质微泡造影剂、靶向纳米脂质微泡造影剂结合率分别为0.83%、75.6%。 5.光镜下OVCAR-3细胞周围可见靶向纳米脂质微泡造影剂围绕或黏附,呈花环样结构。 6.光镜下生物素化的LHRH抗体预先阻断OVCAR-3细胞不能与靶向纳米脂质微泡造影剂结合。 结论: 1机械振荡90s为制作非靶向脂质微泡造影剂最佳时间,即为制备非靶向纳米脂质微泡机械振荡时间。 2.通过冷冻干燥法、机械振荡法和生物素-亲和素桥连法,可成功制备靶向卵巢癌的纳米脂质微泡造影剂此微泡粒径小、稳定性高。 3.靶向纳米脂质微泡造影剂体外能高效靶向人卵巢癌OVCAR-3细胞。 4.被生物素化的LHRH抗体阻断的饱和卵巢癌OVCAR-3细胞不能结合靶向纳米脂质微泡造影剂。 5.靶向纳米脂质微泡造影剂通过LHRH介导与卵巢癌OVCAR-3细胞结合。


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