收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性及其机制的实验研究

王芬  
【摘要】:目的:卵巢癌是女性生殖系统中恶性程度最高的肿瘤,研究表明:卵巢癌肿瘤细胞减灭术后的化疗治疗无可替代,以铂类为基础的化疗方案被视为标准方案,作为一线化疗方案广泛应用于临床。近年来,尽管新的化疗药物层出不穷,但晚期卵巢癌患者5年生存率仍得到有效提高,其主要原因是化疗耐药。本研究从卵巢癌化疗耐药这一临床实际出发,在本课题小组前期工作(在细胞水平证实氯化镧在体外可增强卵巢癌顺铂耐药细胞化疗敏感性)的基础上,在动物水平验证体外试验的研究结果,利用差异蛋白质组学寻找出差异表达的蛋白,并利用免疫组化以及western-blot技术验证其结果,初步探讨氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性的分子机制,为顺铂耐药性卵巢癌的临床治疗提供新的思路和手段,同时为开发稀土氯化镧的药用价值提供科学依据。方法:1.两株细胞(敏感株和耐药株)体内移植瘤分别设为对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组,游标卡尺测量记录各实验组体内瘤结节的长度(a)、宽度(b)和高度(c),按公式计算肿瘤近似体积(V),V=abc*π/6,单位cm3。2.用TUNEL检测不同组(对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组)COC1和COC1/DDP细胞移植瘤的凋亡情况。3.免疫组化法检测不同组(对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组)COC1和COC1/DDP细胞移植瘤肿瘤相关蛋白表达情况。4.采用非标定量蛋白质组学分析方法测定顺铂应用前后对顺铂敏感的卵巢癌细胞COC1和对顺铂耐药的卵巢癌细胞COC1/DDP中的差异表达蛋白。利用GO分析,根据这些蛋白质的细胞成分、生物学过程和分子功能,将它们分为不同的亚群。利用KEGG通路分析来确定这些蛋白质参与的关键信号通路。5.取对数生长期的COC1/DDP细胞分为对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组,培养48h后用Western blot法检测不同实验组细胞中ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl和EB1 5种蛋白的表达情况。结果:1:氯化镧对体内移植瘤生长的影响:顺铂和氯化镧联合作用可以抑制肿瘤在体内的生长。与对照组比,单用顺铂处理可显著降低肿瘤的重量和体积,分别降低45%和54%(p0.001)。顺铂和氯化镧联合处理使肿瘤的重量和体积分别比对照组(p0.001)减少54%和61%。相比之下,氯化镧本身对肿瘤的生长的影响无统计学意义(p0.005)。在COC1和COC1/DDP两组中得出结果基本一致,结果表明,氯化镧联合顺铂可抑制卵巢肿瘤的体内生长。2:TUNEL法检测各组移植瘤的凋亡:与对照组相比,顺铂处理后的COC1细胞中的Tunel阳性细胞明显增多,统计学有显著差异(p0.001)。与氯化镧+顺铂组相比,氯化镧的加入进一步促进了肿瘤细胞的凋亡,因此顺铂联合氯化镧处理组的凋亡细胞比例显著提高(p0.001)。然而,单独使用氯化镧处理组肿瘤细胞与对照组相比,凋亡没有明显的影响(P0.05)。在COC1/DDP细胞移植瘤中的结果与COC1细胞移植瘤结果一致。3:免疫组化法检测各组体内移植瘤中肿瘤相关蛋白表达情况:与对照组相比,顺铂组Ki 67的表达水平降低,氯化镧联合顺铂组Ki67的表达进一步降低,相比之下,单用氯化镧对Ki67表达的影响很小。癌基因和抗凋亡蛋白BCL-2的表达,与Ki67有相似的趋势。相反,人类肿瘤抑制基因BRCA1和BRCA2的表达水平与Ki67和BCL-2相反。也就是说,顺铂提高了BRCA1和BRCA2的表达水平,而顺铂与氯化镧共处理进一步提高了BRCA1和BRCA2的表达水平。DNA修复基因ERCC1的表达,其表达水平与Ki67和BCL-2基本一致,在单用顺铂和顺铂联合氯化镧组中,ERCC1表达的减少。经统计学处理,对照组BCL-2和Ki-67阳性率极显著高于氯化镧组+顺铂组和顺铂组(P0.01)。而BRCA1和BRCA2各组的阳性表达率与ERCC1、BCL-2和Ki-67恰好相反。4:蛋白组学研究结果显示:实验共计检测定性定量蛋白3537个,并对这些蛋白进行了GO注释分析。在COC1和COC1/DDP之间差异表达的蛋白有710个,COC1+顺铂和COC1/DDP+顺铂之间差异表达的蛋白有783个,COC1+氯化镧和COC1/DDP+氯化镧之间差异表达的蛋白有917个,COC1/DDP+顺铂与COC1/DDP+顺铂+氯化镧之间差异表达的蛋白有775个,加顺铂前后,COC1细胞株和COC1/DDP细胞株都有差异的蛋白有411个;加顺铂前后,COC1/DDP和COC1/DDP+氯化镧都有差异的蛋白有536个。其中,14%定位于细胞膜上,KEGG分析,将差异表达的蛋白分为21亚组。5:采用Western blot技术验证功能蛋白表达结果显示:采用Western blot验证5种功能蛋白(ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl和EB1)在顺铂单药、氯化镧单药和顺铂联合氯化镧作用于COC1/DDP中的表达情况,结果表明:顺铂联合氯化镧组EB1和c-Cbl表达量显著高于对照组和氯化镧组,而ERCC1、Ki67、CDK6在耐药株的表达量与EB1和c-Cbl表达量相反。提示氯化镧可能通过多种途径下调ERCC1、Ki67和CDK6的表达,上调EB1和c-Cbl的表达增强顺铂的抑瘤作用。结论:氯化镧通过多种途径下调BCL-2、Ki-67、ERCC1和CDK6的表达,上调BRCA1、BRCA2、EB1和c-Cbl的表达,增强卵巢癌顺铂的敏感性;氯化镧与顺铂联合作用在体内大大促进COC1,COC1/DDP细胞体内移植瘤细胞的凋亡,从而增强顺铂的抑瘤作用,抑制体内肿瘤的生长,但其具体调控机制还需更多的研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 陈晖,吴求亮,陈小珍;氯化镧对变形链球菌的抑菌作用[J];口腔材料器械杂志;1999年03期
2 胡泗才,高静,欧阳高亮;氯化镧对小鼠胃肠推进运动的影响[J];南昌大学学报(理科版);1994年04期
3 汪泱,袁铿,曹勇,李国辉,戴育成,周水莲;氯化镧对内毒素诱导巨噬细胞肿瘤坏死因子表达的影响[J];中华烧伤杂志;2002年02期
4 陈红兵;周昌勇;杨培志;蒋成勇;潘建国;;LaCl_3:Ce~(3+)晶体生长用无水氯化镧的制备[J];人工晶体学报;2006年04期
5 蒋松,邓耀荣,张雅珍;氯化镧与氟钠化在口内局部使用的临床检验情况[J];临床口腔医学杂志;1987年02期
6 张智勇;肖海清;柴之芳;高红昌;雷皓;;核磁共振氢谱研究氯化镧对大鼠脑中代谢物的影响[J];中国稀土学报;2006年S2期
7 汪泱,胡峰,郭菲,袁铿,胡银英;氯化镧拮抗内毒素效应的小鼠体内研究[J];中华医学杂志;2004年03期
8 蒋松,邓耀荣,张雅珍;局部用氯化镧、氟化钠后的牙釉质硬度变化[J];临床口腔医学杂志;1987年04期
9 龚政,陈佩珩,郭志箴,马晋华,陈运生;七水氯化镧脱水过程的离解压和热效应[J];中国稀土学报;1985年02期
10 王小平,刘蜀凡,沈子华;氯化镧对离体人牙釉质抗酸性能的影响[J];中华口腔医学杂志;1994年04期
11 刘贝贝;朱芮;于子博;黄雅莉;李医翠;郑琳琳;;氯化镧对不同发育期仔鼠肝脏抗氧化能力的影响[J];现代预防医学;2018年08期
12 郭菲;赵萍;缪丽芳;陆丹;俞玲芳;汪泱;;氯化镧经Caspase-3途径诱导子宫颈癌细胞凋亡[J];第二军医大学学报;2011年05期
13 张红梅;张明荣;张春生;范宇红;葛云程;赵朝中;;无水氯化镧铈晶体的制备(英文)[J];硅酸盐学报;2008年05期
14 史振怡;杨金国;;合金充填窝沟龋中氯化镧丁香油粘固粉的应用[J];安徽卫生职业技术学院学报;2006年06期
15 钟晓春,戴育成,蒋小红,曹勇,李国辉,李洁,吴燮卿,刘强;氯化镧对大鼠创口组织胶原合成时~3H-脯氨酸掺入的抑制作用[J];中华整形外科杂志;2004年04期
16 高胜利,陈三平,焦宝娟,任宜霞,胡荣祖,赵凤起,史启祯;水合氯化镧与二乙氨基荒酸二乙铵配合行为的热化学[J];化学学报;2003年12期
17 焦根林,汤锡珂,吴兆明;氯化镧对玉米根组织膜透性的影响[J];中国稀土学报;1992年03期
18 张丽锦;李英綦;胡晓宇;孙亚玲;高祥;于淼;刘诗语;蔡原;;特丁基对苯二酚对氯化镧所致原代培养大鼠大脑皮层神经元氧化损伤的拮抗作用[J];环境与健康杂志;2018年12期
19 李珂;叶挺;蒋静;王少飞;;稀土氯化镧在橘皮色素染棉织物中的应用[J];稀土;2019年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王丽琴;王小平;张军;;氯化镧对人牙龈成纤维细胞增殖及细胞因子分泌的影响[A];2004年上海市口腔医学学术年会论文汇编[C];2004年
2 汪泱;;氯化镧拮抗内毒素效应的体外研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
3 王晓冬;王小平;李鸣宇;周曾同;;氯化镧对口腔内8种细菌及3种真菌的抑制作用[A];2004年上海市口腔医学学术年会论文汇编[C];2004年
4 钟晓春;戴育成;曹勇;李国辉;李洁;吴燮卿;刘强;;氯化镧对创口组织中不同型胶原蛋白表达的影响[A];全国烧伤创面处理、感染专题研讨会论文汇编[C];2004年
5 汪泱;袁铿;曹勇;李国辉;周水莲;;氯化镧中和内毒素作用的实验研究[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
6 郭菲;汪泱;李国辉;;稀土镧化合物抑制TNF-α活化NF-κB信号通路[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 刘强;张永模;李国辉;曹勇;胡庆宏;吴燮卿;钟晓春;王文;王言云;;氯化镧对肠源性感染的防治研究[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
8 郭菲;娄远蕾;冯年花;谢安;汪泱;;氯化镧抑制TNF-α诱导NF-κB信号通路活化[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
9 廖明义;李东翰;靳昊宇;;硼氢化钠/氯化镧还原制备液体端羟基氟橡胶[A];第十四届中国橡胶基础研究研讨会会议摘要集[C];2018年
10 郭菲;汪泱;娄远蕾;李国辉;;氯化镧对蛋白激酶C调控LPS诱导iNOS表达的影响[A];第五届全国烧伤救治专题研讨会烧伤后脏器损害的临床救治论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 王芬;氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性及其机制的实验研究[D];南昌大学;2018年
2 闫晓明;氯化镧对人脑胶质瘤SHG-44细胞促凋亡作用的实验研究[D];吉林大学;2004年
3 于彤;长期低剂量摄入氯化镧对大鼠神经系统的影响及机制探讨[D];中国医科大学;2006年
4 郭菲;稀土镧化合物调控核因子κB信号通路的分子机制[D];南昌大学;2008年
5 林仕欣;稀土元素镧、铈、镨对肉牛瘤胃发酵、营养物质消化及血浆生化指标的影响[D];中国农业大学;2015年
6 杨敬华;氯化镧对大鼠学习记忆以及海马Ca~(2+)/CaM-CaMKIV-CREB信号转导通路的影响[D];中国医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张晓旭;稀土元素镧对陆地棉幼苗抗旱性的影响及cDNA-AFLP分析[D];安徽农业大学;2016年
2 臧旖欣;添加氯化镧的树脂基托的抗菌性及机械性能研究[D];佳木斯大学;2018年
3 王伟;UV-B辐射增强下喷施氯化镧对紫花苜蓿生理特性的影响[D];沈阳农业大学;2017年
4 宋书欣;氯化镧对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的保护作用研究[D];江西医学院;2003年
5 李舒雅;稀土氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞的敏感性及其分子机制的体外研究[D];南昌大学;2017年
6 吴洁;氯化镧导致原代大鼠皮层神经元损伤作用的研究[D];中国医科大学;2010年
7 于磊磊;氯化镧对高脂血症大鼠作用的实验研究[D];泰山医学院;2009年
8 鲁帅;氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞毒性作用机制研究[D];中国医科大学;2009年
9 李迎;氯化镧对MBR处理含盐废水的影响研究[D];上海海洋大学;2016年
10 尚江荫子;氯化镧干预磨损颗粒诱导骨溶解的体内实验研究[D];南昌大学;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978