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脂多糖诱导断奶仔猪应激模型脾脏组织结构与相关分子表达变化研究

钟友宝  
【摘要】:本研究通过运用LPS诱导断奶仔猪构建免疫应激模型,探究断奶仔猪应激状态下机体炎症、细胞增殖和凋亡进程,从多角度分析仔猪应激过程的免疫机能及状态,进一步解析和理解仔猪免疫调节机制。本试验研究中50头断奶仔猪随机均分成LPS组和对照组,LPS组每天腹腔注射LPS(100μg/kg bw)一次,对照组注射等体积生理盐水,试验持续13天。在试验第1、4、7、10和13天,每组各选5头仔猪宰杀、采血、称重及收集脾脏组织,全自动血液分析仪检测血常规,Elisa法检测血清促炎性细胞因子水平,观察分析仔猪大体形态特征和脾脏指数。取一份脾脏组织于4%多聚甲醛中固定,经脱水、透明、包埋、切片程序后制成5μm厚切片,HE染色后观察脾脏组织形态,IHC和光密度半定量分析技术探讨IL-1β、IL-6、TNF-α、Skp2、P27~(Kip1)、Caspase-3蛋白分布表达,TUNELPOD染色后观察凋亡细胞分布规律。另取一份脾脏组织液氮速冻后转移至-80℃冰箱,QRT-PCR技术检测Skp2及P27~(Kip1)转录水平。本试验中LPS诱导断奶仔猪应激模型中主要结果如下:①试验初期LPS诱导断奶仔猪呕吐腹泻、食欲降低、体温上升,中期症状改善,后期症状消失;②LPS应激后断奶仔猪脾重及指数明显增大,尤其是第10天;③LPS应激后会外周血细胞成分发生变化,细胞数量和比例发生显著变化;④LPS诱导断奶仔猪的第4、7、10天,脾脏组织生发中心明显、脾小结增多、PALS增厚;⑤LPS应激后促炎性细胞因子浓度发生显著变化,第1天血清和脾脏中IL-1β、IL-6表达水平上升,第4、7、10天血清和脾脏IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降;⑥LPS诱导断奶仔猪第4、7、10天,Skp2阳性细胞数量增多、密集分布于脾小结、边缘区、PALS,主要是淋巴细胞;⑦LPS诱导断奶仔猪第7、10天,脾脏Skp2转录翻译活动增强、P27~(Kip1)转录翻译活动减弱,两者表达呈负相关;⑧LPS诱导断奶仔猪第4、7天,脾脏Caspase-3蛋白表水平下降、凋亡细胞数量减少,细胞凋亡进程受阻。上述结果表明断奶仔猪脾脏可通过自身免疫系统抵御LPS侵袭,维持脾脏正常组织结构、确保生理功能运行。主要体现:促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α合成分泌受到抑制,限制脾脏炎症强度避免组织损伤;Skp2转录翻译水平升高,参与脾脏淋巴细胞增殖分化,增强机体免疫;凋亡蛋白Caspase-3活性抑制,脾脏细胞凋亡进程受阻。


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