外源精胺对猪脐静脉内皮细胞血管形成的影响及其作用机理

【摘要】：胎盘血管的密度和大小决定着胎盘功能,对影响母猪的生产性能具有重大意义,研究胎盘血管的形成对改善母猪生产性能和胚胎健康生长具有重要价值。精胺是由细胞合成的,广泛存在于哺乳动物体内脂肪族胺类,对细胞的增殖分化具有重要作用。本项目旨在应用细胞生物学相关技术手段,从分子和细胞水平研究外源精胺对猪脐静脉内皮细胞血管形成相关基因和蛋白表达的影响,以及血管形成相关信号通路位点的基因表达。为寻找防止母猪胎盘功能不全带来的仔猪宫内发育迟缓的方法提供理论支持。为此,本项目展开如下试验:1.以正常分娩的猪脐带为材料,通过采用I型胶原酶灌注脐静脉,37℃消化15min,具有较好的内皮细胞分离效果。采用高浓度血清,促进原代细胞的生长。分离纯化后的内皮细胞通过形态学和抗CD31,抗vWF蛋白染色鉴定其为内皮细胞。2.不同浓度(0μM、2.5μM、5μM、7.5μM、10μM)的精胺不同程度的影响猪脐静脉内皮细胞的增殖,7.5μM精胺添加量对内皮细胞的增殖促进作用最大(P0.05)。以7.5μM精胺添加量为试验组进行细胞迁移和管腔形成试验。7.5μM精胺处理组中细胞迁移数量与管腔形成数量显著高于(P0.05)对照组。添加7.5μM精胺能够促进脐静脉内皮细胞体外血管形成。3.通过荧光定量PCR技术检测对照组和7.5μM精胺处理组中FGF-2、PLGF、ANG-1、VEGF-A、PI3K、AKT1、m-TOR、S6K1、MEK基因表达量。荧光定量结果表明7.5μM精胺处理组FGF-2、PLGF、m-TOR、MEK的基因表达量显著高于对照组(P0.05)。