下丘脑垂体条件培养基对mmLDL激活巨噬细胞TNF_α、IL-1_β表达的影响

【摘要】： 目的：本文用体外细胞培养方法，用轻度修饰低密度脂蛋白（minimally modified low density lipoprotein, mmLDL）作用培养的巨噬细胞，检测其肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα , TNFα）、白细胞介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）的变化，阐明mmLDL对巨噬细胞的影响；用下丘脑垂体条件培养基（HP-CM）作用mmLDL激活的巨噬细胞，检测TNFα和IL-1β细胞因子的变化，阐明下丘脑垂体条件培养基对mmLDL激活巨噬细胞的调节作用，为探讨动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）斑块形成及破裂的分子机制提供新思路和理论依据。方法：取5个月龄水囊引产人胎，在无菌条件下快速取下丘脑、垂体组织，用0.125%胰蛋白酶消化，用20%小牛血清的DMEM液，置37℃ 5%CO2条件下培养，收集其上清为下丘脑垂体条件培养基。实验将小鼠巨噬细胞分成mmLDL1、mmLDL2、mmLDL3浓度组（mmLDL浓度分别为12.5mg/L、25mg/L、50mg/L）和一个对照组，每组各10孔，各实验组和对照组又分成两个小组[即下丘脑垂体条件培养基作用组（HP）和无下丘脑垂体条件培养基作用组（HP-）]，每组5孔，实验首先在（HP）组中加入下丘脑垂体条件培养基0.5ml和10%小牛血清的RPMI1640培养基0.5ml，（HP-）组加无血清RPMI1640培养基0.5ml和10%小牛血清RPMI1640培养基0.5ml，在37℃，5%CO2条件下培养24小时后，在三个实验组加入mmLDL，使其终浓度分别为12.5mg/L、25 mg/L和50 mg/L ,对照组加等量无血清RPMI1640，PH 7.4，继续培养20h后全部弃培养基，换成无血清RPMI1640培养基继续培养36小时，收集其上清液作TNFα、IL-1β检测。结果：（1）mmLDL对TNFα的影响：mmLDL作用小鼠巨噬细胞20h后，其TNFα表达呈明显上调趋势, 三个实验组分别与对照组相比，均有显著差异（P0.05），其上调与mmLDL浓度呈正相关，mmLDL3mmLDL2 mmLDL1。（2）HP-CM对TNFα的影响：下丘脑-垂体条件培养基对正常巨噬细胞（对照组）和不同浓度mmLDL作用组都有明显的下调作用，其下降率分别为对照组23%，mmLDL1组35%，mmLDL2组26%，mmLDL3组21%，从实验组的下降率可以看出，mmLDL浓度越低其下调率越大。（3）mmLDL对IL-1β的影响：用mmLDL作用小鼠巨噬细胞20h后，其IL-1β表达呈明显上调趋势, 三个实验组分别与对照组相比，均有显著差异（P0.05），其中以mmLDL2组（25mg/L）增加尤其明显（125%）。（4）HP-CM对IL-1β的影响：下丘脑-垂体条件培养基对正常巨噬 WP=4 细胞（对照组）和不同浓度mmLDL作用组都有上调作用,其上调趋势与单纯mmLDL作用组基本一致,但是各实验组与对照组相比，除mmLDL2组（25mg/L）外其余各实验组均无显著性差异（P0.05）；其中HP-组和HP组相比，在对照组、mmLDL1组中均有显著性差异（P0.05）。 结论： mmLDL可激活巨噬细胞TNFα和IL-1β表达上调， HP-CM对正常和mmLDL激活的巨噬细胞TNFα的表达都有明显的下调作用，其下降率与mmLDL浓度呈反比，表明巨噬细胞受mmLDL刺激越小，其调节效果越好，而对IL-1β则有上调作用，这种正反馈调节机制还有待进一步探讨，提示下丘脑垂体轴可能对AS斑块的形成和破裂过程有调控作用。