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杂色曲霉菌变应原的分离、纯化和鉴定

喻海琼  
【摘要】:真菌是引起过敏反应的一种重要的吸入性过敏原,空气传播的真菌孢子,菌丝和碎片与呼吸道及皮肤过敏症状密切相关。真菌的种类繁多分布广泛,其中杂色曲霉菌是湿热沿海及内地常见的气传真菌,目前有关杂色曲霉菌变应原的分离、纯化及免疫学鉴定的研究国内外均未见报道。本研究有助于临床真菌过敏性疾病的诊断并为特异性治疗奠定基础。本研究通过Coca’s提取法得到杂色曲霉菌的菌丝及孢子粗浸液,丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示粗提液含20余种蛋白质组分。采用Western-Blotting法和曲霉菌过敏病人血清鉴定其主要和次要变应原,结果显示分子量为17kDa、20kDa和67kDa的蛋白质对超过50%的曲霉菌过敏病人IgE结合阳性,证实为杂色曲霉菌主要变应原,而分子量为19kDa、22kDa、35kDa和76kDa的蛋白质与曲霉菌过敏病人血清IgE结合阳性少于50%,为杂色曲霉菌次要变应原。通过DEAE-纤维素(DE-52)离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶层析纯化变应原,得到分子量为20kDa主要变应原和35kDa的次要变应原成分,回收率为31.84%。


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