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端粒酶在卵巢颗粒细胞中的表达及其调控机理的研究

张静  
【摘要】:目的:本研究运用TRAP-ELISA法检测卵巢颗粒细胞中端粒酶活性的表达,以及在HCG、FSH、dbcAMP、Verapamil、反义c-myb ODN作用下端粒酶表达的变化,并探讨端粒酶活性与颗粒细胞E2、P0分泌量及颗粒细胞增殖变化之间的关系,为进一步了解卵巢的功能及其调控增添新资料,为开辟新的促生育尤其是治疗和预防卵巢功能早衰及抗生育途径提供新的方法。 方法:分别用外源性激素已烯雌酚及孕马血清促性腺激素制备窦前期及排卵前期卵巢模型,收集颗粒细胞,并将其与HCG、FSH、dbcAMP、Verapamil、反义c-myb ODN共培养,最后再次收集颗粒细胞,采用TRAP-ELISA法及聚丙烯酰胺电泳银染法检测端粒酶活性及其水平的变化。用放射免疫分析法测定培养基中E2、P0含量并同步用MTT法测定颗粒细胞增殖指数,分析它们与端粒酶活性之间的相关关系。 结果:(1) 正常卵巢组织中有端粒酶活性存在,并且窦前期卵巢颗粒细胞端 粒酶活性明显强于排卵前期卵巢颗粒细胞。OD450-OD690值于排卵前卵巢颗 粒细胞中为1.420± 0.4237、 窦前期卵巢颗粒细胞中为2.123±0.009,两组比较有统计学差异(P0.05)。 (2)在各处理因素中FSH、 HCG、dbcAMP、Verapamil能显著增强端粒酶活性(P0.01);而反义c-myb ODN则明显抑制端粒酶活性(P0.01)。(3)在对颗粒细胞增殖指数MTT的测定中我们发现窦前期卵巢颗粒细胞的增殖率高于排卵前期卵巢颗粒细胞组(P0.05)。FSH颗粒细胞组出 WP=5 现明显的增殖(P0.01), Antisense-hTERT ODN,使颗粒细胞增殖受到明显的抑制(P0.01)。同时在窦前期卵巢颗粒细胞组FSH可部分抵消Antisense-hTERT ODN的抑制作用,此组颗粒细胞增殖率与空白对照组无差异;而在排卵前期颗粒细胞组FSH可完全逆转Antisense-hTERT ODN的抑制作用,此组颗粒细胞仍然呈明显的增殖状态(P0.01)。(4)窦前期卵巢颗粒细胞组在不同作用因素下的端粒酶活性与它相对应的E2分泌量呈正相关r=0.953, P0.01。 结论:(1)正常卵巢中表达有端粒酶活性,且窦前期卵巢颗粒细胞中端粒酶活性明显高于排卵前期卵巢颗粒细胞。(2)端粒酶活性受HCG、FSH、dbcAMP、Verapamil以及反义c-myb ODN的调控。(3)用MTT法测定表明反义hTERT ODN能明显抑制颗粒细胞的增殖。(4)端粒酶活性与窦前期卵巢颗粒细胞分泌E2功能密切相关,与窦前期卵巢颗粒细胞分泌P0功能及排卵前期卵巢颗粒细胞分泌E2、P0功能均无明显关系。


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