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NO对微囊化兔神经组织移植后大鼠脊髓损伤的作用

万斌  
【摘要】:目的:观察大鼠脊髓半横断损伤后植入微囊化兔坐骨神经组织对NOS表达的影响,进一步探讨微囊化异种神经组织细胞移植治疗脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的机制。方法:取Sprague-Dawley (SD)大白鼠100 只,体重220-250g,随机分为4组:A 微囊化兔坐骨神经组织细胞移植组(以下简称微囊组)30只;B 兔坐骨神经组织细胞移植组(简称细胞组)30只;C单纯损伤组(简称单损组)30只;D 正常对照组(简称正常组)10 只。无菌条件下取成年家兔双侧坐骨神经干,制备坐骨神经组织细胞悬液及微囊化坐骨神经组织细胞悬液。大鼠腹腔麻醉后,于第10 胸椎打开椎管暴露脊髓,去除右侧半约2mm3脊髓组织,将与脊髓损伤腔大小一致的明胶海绵吸附10ul的微囊化细胞悬液(A 组)或相同数量的细胞悬液(B 组)植入损伤处。A、B 和C 组于术后3、7、14d 各取10 只大鼠,4%多聚甲醛(PH7.4)经左心室主动脉插管灌注,取出损伤平面为中心的8mm脊髓段于上液中后固定2h,30%蔗糖溶液浸泡沉底,冰冻切片(冠状位,片厚25um)。切片分为二套,分别行尼氏(Nissl)染色和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸-黄递酶(NADPH-d)组织化学染色。利用图象分析系统测量Nissl 染色标记细胞数,NADPH-d 组化染色阳性细胞数和阳性细胞平均面积、平均光密度。结果:SCI后神经元数量减少,尼氏体脱失、溶解;术后第7 天及第14 天微囊组Nissl染色神经元数量显著增多(P 0.05)。NADPH-d 组化染色见一氧化氮合酶阳性神经元呈蓝黑色,术后3 天,微囊组和细胞组NOS 阳性细胞数、阳性细胞平均面积及平均光密度均明显高于单损组(P 0.05);第7 天时微囊组NOS 阳性细胞数和阳性细胞平均面积较细胞组高(P 0.01);至第14 天,细胞组NOS阳性细胞数急剧增高超过微囊组,而微囊组仍平稳上升。结论: 微囊化兔坐骨神经组织移植能诱导早期NOS 表达增加及抑制后期NO 过量产生,减轻脊髓继发性损伤,有利于损伤脊髓的修复和再生。


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