收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

PGRN和IL-12家族在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及意义

邱凤  
【摘要】:研究背景 系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)是一种多发于孕龄期妇女的自身免疫性疾病,常累及机体多个组织器官,发病原因至今不明。SLE的病理特点是多种自身抗体的过量表达和大量免疫复合物的沉积。由于SLE累及多个系统和器官,因此患者的生活质量受到很大影响。在SLE患者机体中,促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子的分泌过量调控紊乱,最终导致了机体组织和器官的炎症反应及损伤。颗粒蛋白前体(Progranulin, PGRN)也称之为颗粒蛋白-上皮素前体(granulin-epithelin precursor, GEP),前列腺癌细胞衍生生长因子(prostatic cancer-cell derived growth factor, PCDGF),上皮素前体(proepithelin)等,由颗粒体蛋白(granulin, GRN)基因编码,是一种具有多种生物学功能的自分泌因子。PGRN大量表达于淋巴细胞,神经元,免疫细胞,增殖活跃的上皮细胞和软骨细胞中。诸多研究发现,PGRN在多种生理性和病理性过程中发挥着关键性的作用。例如胚胎的早期发育,创伤愈合和组织重构,炎症反应,免疫反应等。PGRN也是一个重要的神经营养因子,有研究发现GRN基因变异引起的PGRN蛋白的部分丢失可导致额颞叶痴呆。此外PGRN也是一个参与了软骨发育和降解的重要调节因子。Tang W等报道发现PGRN与肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)受体结合,阻断TNF-a的信号转导,从而明显拮抗胶原诱导关节炎小鼠模型的关节炎症反应。因此,PGRN可能是未来治疗自身免疫性疾病的新靶点。然而,PGRN在SLE患者中的表达至今未有报道。糖皮质激素(Glucocorticoid, GC)是治疗SLE的常用药物,通过基因组途径和非基因组途径抑制许多因子的表达和功能。但是糖皮质激素是否对PGRN的表达有影响尚未明确。 基于上述观点,我们在此项研究中检测了SLE患者及健康对照人群外周血中PGRN,IL-6,蛋白酶3(proteinase3,PR3),TNFR, TNF-α的表达浓度及mRNA的表达水平,及抗dsDNA抗体的血清浓度,以探讨PGRN在SLE患者中的作用及其与疾病活动性的关系。此外,还观察了糖皮质激素对PGRN表达水平的影响。 研究方法: 1.研究对象 筛选30例新诊断的SLE患者进入实验组,他们全部符合1997年美国风湿病学院修订的SLE的分类标准。所有实验组患者的SLEDAI (systemic lupus erythematosus disease activity index)评分≥10,入组前都未接受糖皮质激素及其它免疫抑制剂的治疗,并在用药前采集第一次外周血样。入组后所有患者均接受了糖皮质激素治疗,即泼尼松1mg/kg/day。连续给予泼尼松3周后再次采集外周血样。选取30例性别年龄匹配的来我院查体的健康人进入对照组。所有研究对象均签署了山东大学齐鲁医院临床伦理委员会的知情同意书。 2.实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析各细胞因子mRNA的表达 在实验组SLE患者接受泼尼松治疗的前后分别收集5ml外周抗凝血,用红细胞裂解液提取外周血中的单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PMBC),根据说明书用Trizol法提取PMBCs的总RNA。核酸蛋白测定仪初步测定RNA的浓度并标准化至1ug/ml以利于接下来的反转录步骤。用反转录试剂盒获取cDNA后进行实时定量PCR检测PMBCs中PGRN的mRNA的表达水平。 3.酶联免疫吸附试验检测外周血清细胞因子的浓度 在实验组SLE患者接受泼尼松治疗前后分别收集5ml外周自凝血,凝固后离心分离出血清,储存在-80。C条件下。按照说明书用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测血清中PGRN, IL-6, PR3, TNFR和抗dsDNA抗体的血清浓度。 4.统计分析 用SPSS17.0软件进行结果的统计分析。数据用中位数±四分位距表示。PGRN的分布为非正态分布,采用非参数检验。糖皮质激素治疗前组和治疗后组数据的分析采用两个相关样本的非参数检验。实验组和对照组之间的数据分析采用两个独立样本的非参数检验。PGRN与IL-6, PR3/TNFR, TNF-α及抗dsDNA抗体之间的关系用斯皮尔曼等级相关进行分析。认为P0.05差异具有统计学意义。 研究结果 1.研究对象的临床特点 实验组的30例SLE患者中,男性7例,女性23例,年龄12-52岁,平均28.4±9.3岁。病程1-37月,平均12.6±10.1个月。实验组患者的SLEDAI评分,治疗前范围10-23分,平均15.1±3.8分,治疗后范围是6-22分,平均12.2±4.0分。对照组包括女性23例,男性7例,年龄在18-59岁之间,平均30.1岁。 2.SLE患者外周血清中PGRN水平升高 治疗前SLE患者外周血清中PGRN (17.82±5.18, p0.01), IL-6(1.56±1.18, p0.01), TNFR(17.50±10.33, p0.01), TNF-α(89.59±20.27, p0.01), PR3(49.33±18.85,p0.01)和dsDNA抗体(208.19+194.24,p0.01)的浓度均高于正常对照组。在SLEDAI评分≥10的SLE患者中,PGRN外周血清浓度显著升高(p0.05)。治疗后SLE患者与治疗前SLE组相比,外周血清中PGRN浓度显著下降(13.64-±4.51,p=0.002)。治疗后SLE患者外周血清中PGRN浓度显著仍高于对照组人群(11.09±1.62,p=0.002)。总之,无论是治疗前还是治疗后SLE患者外周血清中PGRN的表达均高于正常对照人群。治疗后SLE患者外周血清中IL-6(0.97±0.37,p=0.001), TNFR(10.61±3.70,p=0.025)和TNF-α(54.31±17.17,p=0.012), PR3(48.25±10.89, p0.01)浓度均高于对照组人群。治疗前IL-6, TNFR和TNF-α,浓度高于治疗后SLE患者(p0.05)。PR3在治疗前和治疗后SLE患者中的表达差异无统计学意义p0.05)。 3.S1E患者PMBCs中PGRN mRNA高表达 我们用与内参基因GAPDH比较后的倍数表示PGRN mRNA表达水平的变化。与对照组相比,治疗前SLE患者PGRN mRNA表达相对数值升高了4.4倍(P0.01)(图1)。治疗后SLE患者与治疗前相比,PGRN mRNA表达相对数量下降了1.34倍(P0.05)。 4.激素治疗下调SLE患者的PGRN及其它炎症因子的表达水平 在实验组中,经过GC治疗后,外周血清中PGRN(13.64±4.51, P=0.02),IL-6(0.97±0.37,P=0.022),TNFR(10.61±3.70,P=0.003),TNF-α(54.31±17.17, P=0.0011和anti-dsDNA抗体(137.02±80.71,P=0.038)的浓度明显下降。但是PR3无明显变化(48.25±10.89,P=0.549)。治疗后SLE患者与治疗前相比,PGRN mRNA表达相对数量下降了1.34倍(P0.05);同时IL-6(P0.05)TNF-α(P0.05)and TNFR(0.05)mRNA表达亦明显下降。 5.SLE患者PGRN与其它炎症反应因子的关系 为了明确在SLE患者中PGRN表达水平与炎症反应因子之间的关系,我们用斯皮尔曼等级相关分析了PGRN与IL-6,TNFR,TNF-α,PR3和抗dsDNA抗体之间的相关性。结果显示,治疗前的SLE患者外周血清PGRN水平与IL-6(r=0.790,P0.01),TNFR(r:0.559,P=0.01),TNF-α(r=0.438,P=0.015)和抗dsDNA抗体(r=0.906,P0.01)具有显著相关性。经过GC治疗后,PGRN浓度仍与IL-6(r=0.836,P0.01),PR3(r=0.396,P=0.031),TNFR(r=0.533,p=0.02), TNF-α(r=0.378,P=0.039)和抗dsDNA抗体(r=0.712,P0.01)显著相关。但是治疗前组中,PGRN与PR3的浓度无显著相关性(r=0.298,P=0.110)。 结论 我们检测了PGRN在SLE患者外周血中的表达水平,初步探讨了PGRN在SLE的表达及意义。本研究结果得到以下的结论:(1).PGRN在活动性及稳定性SLE患者的外周血清中浓度显著高于健康对照人群,PMBC的mRNA的表达亦高于健康对照人群;(2).PGRN的受体TNFR, PR3, IL-6, TNF-α及抗dsDNA抗体在活动性狼疮患者中均高表达;(3).无论在治疗前还是治疗后SLE患者中PGRN的浓度与IL-6及抗dsDNA抗体浓度线性相关;(4).糖皮质激素可显著降低PGRN在SLE患者中的表达。总之,PGRN参与了SLE的发生发展过程,且浓度的高低与SLE的疾病活动性相关。我们认为PGRN作为TNF/TNFR的拮抗剂,可能是将来治疗SLE的一个强有力的新靶点。 研究背景 系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)是一种多态性的自身免疫性疾病今病因不明。SLE多发生在20岁到40岁之间的妇女。SLE发病的病理特点是自身抗体的高表达和免疫复合物的沉积,常常累及机体的多个系统和器官。SLE的病因不明,其发病和遗传,环境的相互作用有关。自身免疫耐受平衡的打破导致了自身免疫性疾病的发生发展,SLE也不例外。IL-12家族包括IL-12, IL-23, IL-27和IL-35,它们都是异二聚体,具有调节免疫系统的多种生物学功能。IL-12是由p35和p40两个亚单位组成的异二聚体,对于Thl细胞的分化至关重要。IL-23由p40和p19两个亚单位组成。IL-12和IL-23是促炎症反应因子,分别调节Th1和Thl7细胞的发育。IL-27由EBI-3和p28两个亚单位组成,起初被认为是促炎症反应因子,最近发现它是一个免疫调节因子。IL-35是近年分离出的新的IL-12的家族成员,由EBI-3和p35组成,是强有力的抑炎因子,由胸腺来源的自然调节T细胞产生。糖皮质激素(Glucocorticoids, GCs)是强有力的抗炎和抑制免疫药物,广泛应用于治疗SLE,皮肌炎等自身免疫性疾病。糖皮质激素抑制白细胞向炎症反应部位迁移并通过调节基因表达破坏白细胞,成纤维细胞和内皮细胞的功能;可以明显减少促炎性细胞因子的表达,例如IL-2, IL-6, TNF-α和前列腺素(prostaglandins, PGs)。目前IL-12, IL-23, IL-27和IL-35在SLE患者疾病发生发展过程中的作用未知。在本研究中我们将探讨这些因子在SLE患者中的表达及糖皮质激素治疗对它们的影响。 研究方法: 2.研究对象 筛选30例新诊断的且SLEDAI (systemic lupus erythematosus disease activity index)评分≥10的SLE患者进入实验组。他们的诊断均符合1997年美国风湿病学院修订的SLE的分类标准。所有的实验组患者入组前都未接受糖皮质激素及其它免疫抑制剂的治疗。入组后所有患者均接受了激素治疗,即泼尼松1mg/kg/day。连续给予泼尼松2周后再次采集外周血样。对照组包括30例年龄性别相匹配的健康成年人。所有研究对象均签署了山东大学齐鲁医院临床伦理委员会的知情同意书。 2.酶联免疫吸附试验检测外周血清IL-12家族各因子的浓度 在激素治疗前后分别收集5ml外周血,凝固后离心取得血清,储存在-80℃条件下。按照说明书用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测血清中IL-12, IL-23, IL-27, IL-35, IL-6和抗dsDNA抗体血清浓度。 4.统计分析 用SPSS17.0软件进行结果的统计分析。数据用中位数±四分位距表示。糖皮质激素治疗前组,治疗后组和对照组之间的数据分析采用非参数检验。IL-12家族各因子与IL-6和抗dsDNA抗体之间的关系用斯皮尔曼等级相关进行分析。认为P0.05差异具有统计学意义。 研究结果 5.研究对象的临床特点 实验组的30例SLE患者中,男性7例,女性23例,年龄13-52岁,平均28.4±9.4岁。病程1-37月,平均12.9±10.1个月。实验组患者的SLEDAI评分,治疗前范围10-23分,平均15.2±3.8分,治疗后范围是6-22分,平均12.4±4.0分。 6.SLE患者外周血清中IL-12家族各因子水平升高,糖皮质激素治疗后下降 结果显示,治疗前SLE患者外周血清中IL-12, IL-23, IL-27, IL-35, IL-6和抗dsDNA抗体的浓度均高于正常对照组(p0.05)。治疗后,IL-12, IL-23, IL-27, IL-35, IL-6和抗dsDNA抗体的浓度明显下降,且IL-23, IL-27, and IL-35的水平与正常对照组无显著差异。 3.SLE患者IL-12, IL-23, IL-27, IL-35与IL-6和抗dsDNA抗体的关系 结果显示,治疗前的SLE患者外周血清IL-12水平与IL-6(r=0.897, P0.01),和抗dsDNA抗体((r=0.607,P0.01)具有显著相关性。经过GC治疗后,IL-12浓度仍与IL-6(r=0.897, P0.01)和抗dsDNA抗体((r=0.651,P0.01)显著相关。此外IL-23, IL-27, IL-35的水平分别与IL-6和抗dsDNA抗体水平呈显著相关性。 结论 我们的研究显示,IL-12家族各因子在SLE患者中高表达。IL-12与IL-23与疾病的活动性相关。因此我们需要更多的研究来明确IL-12, IL-23, IL-27和IL-35在SLE疾病的发生及发展中的作用,这将有助于我们发现新的治疗SLE的靶点。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张鸿杰;;SLE并发下腔静脉及髂外静脉血栓1例[J];中外医疗;2008年18期
2 周广宇,杨永净;系统性红斑狼疮中T细胞作用的研究进展[J];国外医学.免疫学分册;2005年05期
3 孟锦焕;张晓;陆才生;余步云;;系统性红斑狼疮124例治疗的临床研究[J];中国实用医药;2010年27期
4 唐代明;余学明;;系统性红斑狼疮患者SFaS测定的探讨[J];中国社区医师(医学专业半月刊);2008年12期
5 李东辉,王锦德,董德寅,李蔚林,高青玲;中西医结合治疗对系统性红斑狼疮实验室指标的影响[J];西北国防医学杂志;1994年03期
6 钱先;中西医结合治疗系统性红斑狼疮提高生活质量的临床观察[J];实用中医药杂志;1998年03期
7 胡曼东;22例系统性红斑狼疮神经系统损害临床分析[J];现代中西医结合杂志;1997年01期
8 杨春莉,裘宇容;流式细胞仪对系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群及NK细胞的检测[J];第一军医大学学报;2000年03期
9 李海珠,陈梅,于莹;16例系统性红斑狼疮的护理对策[J];黑龙江医药科学;2004年02期
10 卜东明,姜波;绝经后起病的女性系统性红斑狼疮误诊分析[J];江苏临床医学杂志;2001年05期
11 赵巧红,叶佩仪,陈国强;2例系统性红斑狼疮并卡氏肺孢子虫肺炎的观察与护理[J];齐齐哈尔医学院学报;2004年08期
12 袁淑珍,王晓华;血清标记抗体对系统性红斑狼疮疾病的诊断[J];黑龙江医药科学;2000年03期
13 唐毅,刘宁涛,陈拥军,熊丽,何芳;系统性红斑狼疮患者食管测压研究[J];四川医学;2003年10期
14 蒋丽君;;系统性红斑狼疮患者依从性及社会支持的研究进展[J];华夏医学;2008年04期
15 王冬怀 ,陈亚宝;血清中可溶性Fas FasL与SLE关系的探讨[J];海南医学;2002年07期
16 杨萍,孙书明,王小波;系统性红斑狼疮患者血清中泌乳素与性激素的检测及意义[J];齐齐哈尔医学院学报;2004年01期
17 任跃忠,戴巧定,徐荣臻;系统性红斑狼疮患者新的内源性逆转录病毒NP9基因表达及其蛋白功能预(英文)[J];中华医学遗传学杂志;2005年03期
18 韦明欣!南宁530021,唐绍贤!南宁530021;226例系统性红斑狼疮医院感染调查[J];中华医院感染学杂志;1999年04期
19 林翼金,睦旭东,李保春;SLE患者外周血白细胞糖皮质激素受体的研究[J];徐州医学院学报;1992年02期
20 王仲英;刘锋;赵平;;系统性红斑狼疮病人常见死因的探讨[J];吉林医学;1991年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 卢桂玲;;系统性红斑狼疮患者Th1/Th2相关转录因子的基因表达[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
2 潘海峰;叶冬青;;Th17及其相关细胞因子与系统性红斑狼疮的发病机制研究进展[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年
3 张闽光;张晓嫣;王建萍;邢东炜;苏晓;;系统性红斑狼疮胸部CT短期随访分析(附64例报告)[A];第十一次全国中西医结合影像学术研讨会暨全国中西医结合影像学研究进展学习班资料汇编[C];2010年
4 黄卫华;;免疫吸附治疗重症系统性红斑狼疮[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
5 梁军亮;陈宏;;亲环素A mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及其临床意义[A];第五届全国中西医结合变态反应学术会议论文集[C];2011年
6 李文先;陈贵梅;袁慧;李若洁;叶冬青;;TIM家族基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年
7 王友莲;付强;桂小美;施春花;张娜;邹伏英;尚可;;系统性红斑狼疮患者血清C1q检测临床意义[A];2011年华东六省一市风湿病学学术年会暨2011年浙江省风湿病学学术年会论文汇编[C];2011年
8 吴凤霞;杨程德;袁国华;;趋化因子CXCL13在系统性红斑狼疮患者的血浆表达及其临床意义[A];2011年华东六省一市风湿病学学术年会暨2011年浙江省风湿病学学术年会论文汇编[C];2011年
9 田锋;李敬扬;文振华;;系统性红斑狼疮合并妊娠5例报道[A];2009中国中西医结合系统性红斑狼疮研究学术会议资料汇编[C];2009年
10 刘钢;;类风湿关节炎及系统性红斑狼疮辅助检查路径分析与临床诊治[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邱凤;PGRN和IL-12家族在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及意义[D];山东大学;2013年
2 张少然;T辅助细胞亚群联合检测对系统性红斑狼疮病情评估价值的研究[D];山西医科大学;2011年
3 陶金辉;滤泡辅助性T细胞与系统性红斑狼疮的相关性研究[D];安徽医科大学;2011年
4 韩建文;中国汉族人系统性红斑狼疮全基因组关联分析研究[D];安徽医科大学;2010年
5 张峻岭;系统性红斑狼疮遗传免疫特征及HLA基因与临床相关性分析[D];天津大学;2011年
6 张昀;系统性红斑狼疮的临床分子流行病学研究[D];北京协和医学院;2010年
7 邹延峰;安徽省农村人口系统性红斑狼疮患病率及其环境相关因素研究[D];安徽医科大学;2011年
8 张立民;系统性红斑狼疮MicroRNA表达谱和功能的初步研究[D];中国协和医科大学;2010年
9 刘倩;转录因子E4BP4在系统性红斑狼疮发病中的保护性作用及其分子机制[D];中南大学;2013年
10 王梅英;Proline-Rich Tyrosine Kinase 2 (PYK2)在系统性红斑狼疮患者发病机制和治疗中的作用研究[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周卫;女性系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中雌激素受体的表达及其在炎性病变中的作用研究[D];川北医学院;2011年
2 张滔;汉族人群干扰素调节因子3基因多态性及环境因素与系统性红斑狼疮的关联性研究[D];安徽医科大学;2010年
3 王贞;高级氧化蛋白产物在系统性红斑狼疮早发动脉粥样硬化中的临床意义[D];福建医科大学;2010年
4 朱立炜;系统性红斑狼疮患者生活质量与临床护理的相关研究[D];安徽医科大学;2010年
5 邓红宇;系统性红斑狼疮患者外周血内皮祖细胞数量及分化功能的研究[D];泸州医学院;2011年
6 吴凤霞;趋化因子及受体基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究[D];川北医学院;2010年
7 杜晓敏;血清骨桥蛋白水平与系统性红斑狼疮疾病活动性及脏器损害的相关性研究[D];天津医科大学;2010年
8 朱青青;3种基质金属蛋白酶与系统性红斑狼疮的相关性研究[D];安徽医科大学;2010年
9 高飞;转录因子RFX1在系统性红斑狼疮发病中的作用研究[D];中南大学;2010年
10 刘翠莲;系统性红斑狼疮患者外周血Fcolin-3检测及临床意义[D];暨南大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 朱永基;首个SLE数据库助力规范化诊疗[N];健康报;2011年
2 邵建国;B细胞药物:靶向系统性红斑狼疮[N];医药经济报;2009年
3 俊英;中西医结合可延长系统性红斑狼疮稳定期[N];中国医药报;2009年
4 陈静;系统性红斑狼疮研究成果获国家科技进步二等奖[N];保健时报;2010年
5 孙维生;如何早期防治系统性红斑狼疮?[N];潮州日报;2009年
6 北京大学人民医院风湿免疫科教授 栗占国 本报记者 魏平 整理;解救系统性红斑狼疮:糖皮质激素治疗贯穿始末[N];医药经济报;2011年
7 记者 王丹;系统性红斑狼疮“中国数据”发布[N];健康报;2011年
8 通讯员 孙国根 记者 陈青;系统性红斑狼疮有新疗法[N];文汇报;2011年
9 孙国根;治疗系统性红斑狼疮有了“新钥匙”[N];中国医药报;2011年
10 本报记者 胡德荣;降伏红斑狼疮 “仁济”领跑[N];健康报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978