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非小细胞肺癌CT能谱成像与VEGF、MVD及Ki-67表达的相关性研究

王广丽  
【摘要】:目的:通过对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)CT能谱成像的碘-水配对基物质浓度值、能谱曲线斜率、40keV对应的CT值的测量以及肺癌组织中VEGF、MVD及Ki-67表达的测定,探讨非小细胞肺癌CT能谱成像定量参数与肿瘤生物标志物的相关关系。资料与方法:48例经手术切除且病理学检查证实为NSCLC的患者,术前均采用宝石能谱CT(Discovery CT 750 HD,GE Healthcare,Mliwaukee,USA)在能谱扫描模式(GemStone imaging,GSI)下行胸部双期增强扫描。管电压为140和80 kVp瞬时(0.5s)切换,管电流采用自动毫安,螺旋扫描速度为0.5s/周,螺距为0.516,准直器宽度为40mm。采用高压注射器经外周静脉注入对比剂碘海醇(300mgI/m1),注射剂量为1.2mg/kg,注射流率为3.Oml/s。扫描层厚及层间距均为5.00mm,注入对比剂后28 S行动脉期扫描,45 S行静脉期扫描。将动脉期原始数据在单能重建算法下重建为层厚及层间距均为0.625 m的图像传至后处理工作站AW4.4(GE Healthcare,USA),应用宝石能谱成像浏览器(GSI Viewer)软件进行分析处理,病灶能谱分析尽量选取病灶中间层面,避开坏死、空洞、钙化及血管等,放置圆形感兴趣区(Regions of interest,ROI),测量ROI碘-水配对基物质浓度值(g/L)及40 KeV对应的CT值,并计算相应的能谱曲线斜率:CT40 keV-CT100 keV|/60,所有能谱曲线均经水的能谱曲线标准化处理。手术切除标本经中性福尔马林缓冲液固定、组织处理、石蜡包埋备用。采用兔抗人VEGF单克隆抗体(1:50,ab52917,Abcam,Cambridge,UK)、兔抗人CD105单克隆抗体(1:250, ab169545, Abcam, Cambridge, UK)、兔抗人Ki-67单克隆抗体(1:500, ab92742, Abcam, Cambridge, UK)、免疫组化检测试剂盒,应用MaxVision快捷免疫组化染色检测其VEGF、MVD及Ki-67的表达情况。VEGF结果判定:VEGF表达阳性细胞为胞浆或胞膜出现浅黄色、棕黄色或黄褐色颗粒。肿瘤组织VEGF表达以细胞染色强度和细胞染色百分率得分之和进行判定。染色强度:无染色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,黄褐色为3分。细胞染色百分率:阳性细胞数≤5%为0分,5%-25%为1分,25%-50%为2分,50%为3分。两者相加为VEGF表达总得分。根据总得分情况将VEGF表达分为四个等级:0分为阴性(-),1、2分为弱阳性(+),3、4分为中等阳性(++),5、6分为强阳性(+++)。MVD结果判定按照Weidner等所描述的方法。两名病理科医师使用光学显微镜(Leica DM2500)在低倍及高倍视野下观察。先在低倍(×100)显微镜下选出三个微血管数最多的区域(热点),再在高倍(×400)显微镜下观察并计数,三个视野的微血管数取平均值即为MVD。棕黄色的阳性内皮细胞或内皮细胞簇且与邻近微血管、瘤组织及其他结缔组织成分清晰分离的计为一个微血管,无论有无管腔形成。管径大于8个红细胞或有肌层的血管不予计数。Ki-67结果判定标准:Ki-67着色于细胞核,呈棕黄色颗粒,高倍镜(×400)下随机选取5个视野,每个视野计数100个细胞,计算阳性细胞平均数。Ki-67表达用阳性细胞百分率表示,并分为四个等级((0,1%;1,1-10%;2,11-30%;3,30%)。所有数据的统计学分析均采用SPSS 20.0(IBM Inc., Armonk, NY, USA)统计软件,计量资料均以平均值±标准差(i±s)表示;用单因素方差分析进行VEGF和Ki-67表达等级不同的NSCLC患者间能谱参数的比较,然后用SLD-t检验的方法进行组间的两两比较。用Spearman等级相关分析观察NSCLC组织VEGF、MVD和Ki-67的表达与CT能谱参数(碘浓度、水浓度、能谱曲线斜率和40KeV对应的CT值)的相关性。P0.05为差异有统计学意义。结果:在48例NSCLC患者的手术标本中,VEGF表达总得分为1.75±1.50分。VEGF表达阴性者18例(37.50%);表达阳性者30例(62.50%),其中弱阳性12例,中等阳性18例,没有表达强阳性者。碘浓度、能谱曲线斜率及40KeV对应的CT值在不同VEGF表达级别组间存在显著差异。组间两两比较:阴性与中等阳性、弱阳性与中等阳性间的碘浓度、能谱曲线斜率及40KeV对应的CT值有显著差异,而阴性与弱阳性间上述参数无显著差异;水浓度在各级别间均无显著差异。碘浓度、能谱曲线斜率和40KeV对应的CT值与肿瘤组织内VEGF的表达得分和表达强度均呈正相关;水浓度与VEGF的表达得分和表达强度均无相关关系。MVD值为16.50±6.48,CT能谱成像测得的碘浓度为1.05±0.41g/L,水浓度为1021.90±10.78g/L,能谱曲线斜率为1.18±0.47,40KeV对应的CT值为104.16±33.66HU。 MVD值与碘浓度呈正相关(r=0.31,P=-0.032),与水浓度呈负相关(r=-0.29,P=-0.042),与能谱曲线斜率呈正相关(r=-0.30,P=-0.038),与40KeV对应的CT值无相关关系(r=0.13,P=-0.391)。Ki-67阳性细胞百分率为40.83%±31.62%。表达1级10例(20.83%),2级13例(27.08%),3级25例(52.08%),没有0级的患者。不同Ki-67表达等级间碘浓度、水浓度、能谱曲线斜率及40KeV对应的CT值均无显著差异。NSCLC组织内Ki-67阳性细胞百分率和表达等级与碘浓度、水浓度、能谱曲线斜率及40KeV对应的CT值均无相关关系。结论:非小细胞肺癌CT能谱成像的碘浓度、能谱曲线斜率与VEGF及MVD的表达均呈正相关,可间接反映肿瘤血管的生成状态,在肺癌的病理判断、肿瘤的恶性程度及预后的预测方面有潜在价值。40KeV对应的CT值与VEGF的表达呈正相关,与MVD无相关关系,水浓度与MVD呈负相关,与VEGF无相关关系,对于肿瘤血管生成状态的评价有一定的参考价值。非小细胞肺癌CT能谱成像的各定量参数与Ki-67的表达均无相关关系。


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